五 我国转基因生物安全管理与评价 第六章 转基因动植物及转基因检测 一 什么是转基因动植物 二 转基因植物损益 三 转基因动植物的安全性 四 转基因研发及应用国内外现状 五 我国转基因生物安全管理与评价

一 什么是转基因动植物 转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因 组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的 修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology） 。人们常说的“遗传工程”、“基因工程"、"遗传转化"均为 转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被 称为“遗传修饰过的生物体”（Genetically modified organism，简称GMO）。 转基因是随着人类对事物质和量的需求，采用的一种人为强加的动植物快速进化的基因技术手段，是违背优胜劣汰、适者生存自然法则，是对地球生命的挑衅，是对生物系统论的一种悖逆，其安全性根本无法在短期内得到准确的结论，而是需要几代人、甚至数百年的生物系统验证。

一二 转基因植物损益 植物转基因技术 将优良性状的目的基因导入植物细胞或组织，并在其中进行表达，从而使植物获得新的性状。

转基因植物的类型 抗病转基因植物：抗病毒转基因烟草 抗虫转基因植物：抗虫棉 抗逆转基因植物：抗旱、抗盐碱 抗除草剂转基因植物：抗除草剂转基因玉米、大豆、棉花、油菜 改良品质转基因植物：转几丁质酶基因水稻 转基因药品植物：生产霍乱疫苗的胡萝卜

转基因植物的贡献 增加农作物产量 降低生产成本 减少化学农药对环境的污染 改善农作物品质 提高经济效益

1983年，转基因烟草、胡萝卜问世 植物转基因研究发展 20余种植物产品通过FDA认证、13个国家种植转基因植物、转基因作物遍布6大洲 2000年商业化种植面积比1996年翻了几倍 预测：2020年世界上80 ％ -90％的农作物将是转基因植物

转基因植物的生产(图例) 样品比较（左为普通棉花，右为兔毛转基因棉花） 抗除草剂大豆

抗除草剂作物

抗虫棉花

转查尔酮合酶矮牵牛花 抗CMV病毒转基因番茄 抗CMV病毒转基因甜椒

抗细菌斑点病马铃薯

转基因植物种植面积增长速度

2004年生物技术大国转基因作物种植情况 排序 国家 主要作物 面积（万公顷） 占全球百分比（％） 年增长率（％） 备注 1 美国 玉米、大豆、油菜、棉花 4760 59 11 2 阿根廷 大豆 1620 20 17 3 加拿大 玉米、大豆、油菜 540 6 23 4 巴西 500 66 5 中国 棉花 370 32 巴拉圭 120 新增 7 印度 50 400 8 南非 玉米、大豆、棉花 25 9 乌拉圭 大豆、玉米 30 <1 200 10 澳大利亚 100 罗马尼亚 12 墨西哥 棉花、大豆 13 西班牙 玉米 14 菲律宾

我国转基因作物种植情况 已商业化的GMC有:棉花(46项)、线辣椒(1项)、甜椒(4项)、矮牵牛(1项)、番茄(6项)，共58项。 转基因棉花是我国主要的GMC。 2009年,作为全球最大的水稻生产和消费国,中国政府已经批准首个转基因水稻品种投入商业化种植。

转基因生物给人类创造了巨大的经济和社会效益的同时，也可能给人类带来极大的潜在或现实危害。 三 转基因动植物的安全性 转基因生物给人类创造了巨大的经济和社会效益的同时，也可能给人类带来极大的潜在或现实危害。 所培育出来的转基因生物给人类创造了巨大的经济和社 会效益。但转基因生物作为一个新物种的出现,一 旦释放到自然环境中,也可能给人类带来极大的潜在或现实危害。

1、康奈尔大学斑蝶事件 1999年5月，康奈尔大学的一个研究组在《Nature》杂志上发表文章，声称用带有转基因抗虫玉米花粉的马利筋(一种杂草)叶片饲喂美国大斑蝶，导致44％的幼虫死亡，由此引发环境安全性的争论。

2、加拿大“超级杂草”事件 1995年，加拿大首次商业化种植了通过基因工程改造的转基因油菜。但在种植后的几年里，其农田便出现了对多种除草剂具有耐抗性的野草化的油菜植株，即超级杂草。

2008年11月11日，奥地利政府发布最新科学研究显示，长期食用Ｍon810转基因玉米的实验鼠生育能力有所下降，而且后代重量轻、体质弱。 3、奥地利转基因玉米事件 2008年11月11日，奥地利政府发布最新科学研究显示，长期食用Ｍon810转基因玉米的实验鼠生育能力有所下降，而且后代重量轻、体质弱。

转基因的安全性 http://blog. sina. com. cn/s/blog_5b57739c0100tuit 转基因的安全性 http://blog.sina.com.cn/s/blog_5b57739c0100tuit.html 1 基因漂移 2 生态系统破坏 3 违背丛林法则 挑衅进化论 物竞天择 适者生存（严复 天演论） 弱肉强食 优胜劣汰 丛林法则 4 人类灭绝：转基因安全性的终端评估！

农业技术落后国家面临农业产业被殖民化的危险 四 转基因研发及应用国内外现状 农业技术落后国家面临农业产业被殖民化的危险 巴西和阿根廷农业产业所用种子、化肥、农业生产机械的80%以上依赖于跨国公司提供。外国资本已经控制了巴西和阿根廷的农业产业，这两个农业大国已经成为了西方国家的农业殖民地。

失去基因资源中国将永远失去自主使用这些基因的机会，将为此付出高昂的经济代价 发达国家大跨国公司巨资进行农业生物技术产业化研发并抢占国际种业市场 失去基因资源中国将永远失去自主使用这些基因的机会，将为此付出高昂的经济代价 孟山都 (Monsanto)，杜邦 (DuPont)，先正达(Syngenta)、BASF和Bayer等五大跨国公司已控制着国际种业70%的市场 （2006年300亿美元，预计2010年1500亿美元） 国外转基因种子(如抗虫棉等)和转基因产品(如转基因大豆)已经进入中国市场 如2008年中国进口大豆达3744万吨，远超国内大豆年总产量（1750万吨），2009年2月进口326万吨，较去年同期增长61.2%。 前三个跨国公司已经开始在中国设立研发机构和组建研发团队 从外部来看， 农业技术落后的国家面临农业产业被　殖发化的危险。巴西和根廷现在已成为了西方国家的农业殖民地，他们所用的种子化肥农用机械80%依赖跨国公司。个跨国公司已在中国设立了研中心。形式是很紧迫的，失去基因资源中国将永远失去自主使用这些基因的机会，将为此付出高昂的经济代价。我国转基因大豆进口壁垒失守就是一个惨重 教训。 保障中国粮食安全的根本出路在于发展现代农业技术，要靠分子育种。

1996－2010年种植面积增长87倍，每年以大于10%的比率增长，做为发展最快的技术之一，转基因技术及应用是大势所趋，已经势不可挡。 1983～1993年：技术成熟期 1983年首例转基因植物(烟草和 马铃薯)培育成功 1994～2005年：产业发展期 转基因抗虫、抗除草剂产品进入 商业化生产 2006～2016年：战略机遇期 2006年商业化种植面积超过1亿亩 ( 转基因作物15年累计10亿公顷，全球数十亿人次十多年消费应用，至今未出现一例可证的因为种植和应用转基因作物和转基因产品出现生态环境和人体健康安全问题的报道。)

主要国家转基因作物种植面积的比较 ● ● ● ● 总体来说，转基因生物及其产品出口国，以及转基因　技术发展图快的国家和地区，通常采取较为积极、开放的这理策略，以促进技术应用和出口；反之，转基因生物及其产品进口国，以及技术发展较为落后的国家和地区，则往往会采产为严紧的管理策略，并以此作为技术性贸易措就行施，以维护本国产业、贸易利益。 中国是美国种植面积的15倍。

研发投入差距 中国转基因专项： 2008年启动，预计到2020年总投资约200亿元人民币，估年均投资15-20亿元 13.93亿美元 人民币：亿元 13.93亿美元 9.8亿美元 9.69亿美元 2.2--2.93亿美元

1996年商业化，当时有6个国家，种植面积共170多万公顷， GMOs应用现状（1996－2010） 1996年商业化，当时有6个国家，种植面积共170多万公顷， 2010年有29个国家种植GMOs（ USA，巴西、阿根廷、印度，加拿大，中国和南非等），包括1540万农户，总面积1.48亿公顷。 1996～2010年（15年）累计种植面积超过10亿公顷。 4种作物：大豆（77%） 、棉花（50%） 、玉米（25%）、油菜（20%） 。 2个性状：抗草苷膦(EPSPS) ，抗虫(Bt)。 15年来，转基因作物不仅带来了经济效益、而且珲带来了巨大社会和环境效益。

例：抗虫棉--中国的获益 1997年开始商业化。 目前种植面积5000多万亩， 12年累计减少农药用量80万吨， 减少农药中毒，及对土壤和水体的污染， 纯经济效益超过300亿美元， 其它作物上棉铃虫虫口密度降低。 国产抗虫棉由1997年的市场份额 5%，2009上升为90% 除新彊棉区外，全种 BT COTTON.

全球GM水稻许可概况 Event 年份 国家 性状 CL121, CL141, CFX51 2002饲料 加拿大 抗除草剂 PWC16 2003饲料 IMINTA-1, IMINTA-4 2006饲料 LLRICE06, LLRICE62 2000食/饲料 USA, Canada, Australia, Mexico　 LLRICE601 2006环境 USA,　Colombia Bt华恢1号 2009 中国 抗虫 Bt籼优63 一下争议较多的GM主粮，水稻、小麦商业化情况。 批准转基因水稻我们并不是第一家，1999年批准环境释放。早在2000年，USA就批准可以作为食品和饲料用。

全球GM小麦审批概况 Events 年份 国家 性状 SWP965001 1999 加拿大 抗除草剂 AP602CL 2003 2004 MON71800 美国　哥伦比亚 Teal 11A BW255-2, BW238-3 2006 BW7 2007

五 我国转基因生物安全管理与评价 GMO安全性与产业化的关系 权衡利弊，若不采用转基因作物，其后果会如何？ 弊：粮食安全不能保障，国家主权受威胁， 利：增产、增收、低投入、更营养、环保、生态友好、提高土地和水的利用率。 “安全第一”　vs. “民以食为天” 二者并不对立，可以在保障安全的前提下促进GMOs产业的发展! 转基因食品安全吗？公众所想到的是吃了会不会不安全。首可以肯定的是，从1996年至今15年间，转基因作物累计10亿公顷，全球数十亿人次十多年消费应用，至今未出现一例可证的因为种植和应用转基因作物和转基因产品出现生态环境和人体健康问题的报道。 “不考虑饥饿、营养不良和儿童夭折等人类悲剧，一味地谴责生物技术的潜在风险，与盲目地利用生物技术而不考虑必要的生物安全一样，都是不明智的。” （FOA驻华助理张忠军） 我们是要侧重安全呢，还是要保证民以食为天的基本需求呢？其实，这个问题并不对立。完全可以在保障安全的前提下，促进产业的发展。 并不鐌警察　抓小偷似的。

国 策 邓小平：“将来农业问题的出路，最终要由生物工程来解决，要靠尖端技术” (1988年) 温家宝： “解决中国粮食紧缺问题要靠大的科技举措，要靠生物技术，靠转基 因。” （2008年在接见《science》总编） 2010年中央一号文件：抓紧开发具有重要应用价值和自主知识产权的功能基因和生物新品种，在科学评估、依法管理基础上，推进转基因新品种产业化。 刘延东：进一步加强统筹协调，建立科学、规范、高效的转基因生物安全评价机制及其新品种审定机制，以加速种业发展为重点。 (2010年7月听取生物医药板块重大专项的汇报) 2011年十二五发展计划要求：“加快农业生物育种创新和推广应用，开发具有重要应有价值和自主知识产权的生物新品种，做大做强现代种业。” 国家发展规划： 《863计划》 《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006－2020年）》 《当前优先发展的高技术产业化重点领域指南》 对于以转基因为代表的生物技术，我国政府的态度是积极的： 我国政府对生物技术给予了高度重视并一贯支持。

中国GMOs生物安全管理体系 法规体系 国务院令（2001） 《农业转基因生物安全管理条例》 农业部 《农业转基因生物安全评价管理办法》 《农业转基因生物安全评价管理办法》 　　 《农业转基因生物标识管理办法》 　　 《农业转基因生物进口管理办法》　 《农业转基因生物加工审批办法》　 相关公告、评价指南、标准和规范 质检总局 《进出境转基因产品检验检疫管理办法》 严谨的生物安全管理体系。

中国GMOs生物安全管理体系 管理体系 部际联席会议： 负责研究、协调农业转基因生物安全管理工作中的重大政策和法规问题。 农业部 负责安全评价、监督管理、体系建设、标准制定、进口许可和进口管理 县级以上农业行政主管部门 负责本区域监督管理，生产、加工和标识许可　 质检总局及职能部门 负责进出境检验检疫　

中国GMOs生物安全管理体系 评价体系及技术支撑 农业转基因生物安全管理委员会：现有60名成员。负责农业转基因生物的安全评价工作。农业转基因生物安全委员会由从事农业转基因生物研究、生产、加工、检验检疫、卫生、环境保护等方面的专家组成，每届任期三年。 农业转基因生物安全管理标准化技术委员会 ：负责农业转基因生物及其产品研究、生产、加工、贸易有关的国家检测标准制定与修改。农业转基因生物安全委员会由从事农业转基因生物研究、生产、加工、检验检疫、卫生、环境保护等方面的专家组成。每届任期3年，2004年11月成立。 检测机构：37个GMOs全安评价检测机构，62项技术标准。

中国GMOs生物安全管理体系 分级管理 按照危险程度对受体植物、转基因操作、转基因植物、生产加工过程及转基因产品分别评级： 　安全等级I： 尚不存在危险 　安全等级II：具有低度危险 　安全等级III：具有中度危险 　安全等级IV：具有高度危险

标识制度 ----第一批GMOs标识产品目录 5大作物，17种产品 大豆：种子，豆粉，豆油，豆粕； 玉米：种子，玉米，玉米油，玉米面； 油菜：种子，菜籽，菜籽油，菜籽饼； 棉花：种子； 番茄：种子，鲜番茄，番茄酱。 中国实行强制标识，阈值是0，只有含有就需要标识。棉籽粕，棉籽油不用标识 并不是因为不安全才标识，而是为了保护消费者的知情权和选择权，是“个人喜好”问题，而不是“安全”问题。

(这些顾虑是可以通过科学普及和加强转基因管理消除的) 公众对GMOs的顾虑 会影响人类健康吗？ 会带来生态灾难吗？ 会威胁到国家粮食安全和主权安全吗？ 政府忽略公众的知情权了吗？ (这些顾虑是可以通过科学普及和加强转基因管理消除的) 就转基因生物本身来说，并没有特别的地方值得引起大家如此观注，但由于参入了政治、国际贸易、宗教、文化的因素，所以引起了现在的轩然大波，网络上已经把转基因食品比做洪水猛兽。 目前公众对转基因的顾虑焦点在以下4个方面：食品安全问题，环境安全问题，知识产权问题，和公众知情权问题。 首先大家会问：转基因食品会影响人类健康吗？ 我吃了转基因大豆，转基因能不能转到我身上啊？转基因大豆中有上万个大豆本身的基因，万什么偏偏那个外源基因能转移到人基因组中？我们吃了几千年的猪肉，没一个变成猪八戒的（开玩笑） ；还没有证明基因能在植物到动物的平行转移。 另一个顾虑到是有可能发生，就是抗生素抗性基因会不会转移到我们肠胃内的微生物基因组中，这样吃抗生素也不管用了，这方面也不用担心，目前转化的载体都是洁净的，不含抗生素的载体，或在转基因分离后代可掦除的转化系统； 虫子吃了都死，对人是不是也有害啊？（请听众回答）不会，3个原因：第一，受体问题，在鳞翅目昆虫幼虫的中肠有Bt蛋白的受体，而人没有，二：Bt蛋白在碱性的鳞翅目昆虫中肠中才被激活，而人的胃液是PH值为2的强盐酸环境，三，Bt蛋白不耐高温，在蒸煮过程中就失活了。所以人吃了不会影响健康。而虫子吃了就会得‘冐溃疡’，就饿死了。 现在所批准的转基因食品均经过严格的食品安全性评价（依现有的知识作出的判断）证明是安全的，都是可以放心使用的。 会带来生态灾难吗？ 所转的抗除草剂基因的花粉传到了杂草中，杂草就无法治理了。这个问题这样回答，首先，在栽培种和野生种、野生近源种及杂草之间存在生殖隔离，天然异交率很低。 即使抗除草剂基因漂移到杂草中，也不是会产生超杂草，因为，在自然环境是没有除草剂的，没有选择压，这个外源基因就会被一代一代稀释掉，最后就消失了。 我们从事转基因试验用产业化，会威胁到国家粮食安全和主权安全吗？ 关于知识产权问题，有人担心会落入跨国大公司的“专利陷井”。因为我国转基因水稻中含有多个外国公司的技术专利。设想在全球化的今天，很难想象一个复杂项目中，所有的技术是一个研发商自主研究成功的，就像生产计算机、汽车一样，知识产权不全在我们手里，我们还是在生产。连孟三都这样的大公司也会从别的公司购买专利。只要关键专利在我们手中就可以了，更何况，转基因水稻涉及的外国技术，有些已经过期，有些根本就没有在中国注册。 目前中国的农业科研是国家科研体制，在转基因作物的研究方面，能够获得国家政策的支持，相关科研可以迅速走在世界前沿。这是集中力量办大事的优点。抗虫棉就是一个好例子。 政府忽略公从的知情权了吗？ 目前被各国批准的转基因作物经过严格的分析和评估，并不存在安全方面问题，即便如此，为了保障消费者的知情权，我国实行强制标识制度，2002年出台了《农业转基因生物标识管理办法》，待会我会向大家介绍。EU的标识阈值是0.9%，日本是标识阈值是5%，美国认为转基因食品与传统食品没有本质区别，不值得特别的关注，可自愿标识。 所以，针对转基因的争议，黄大昉研究员在2010年吴邦国主持的11届全国人大常会专题讲座中讲到：对转基因技术的争义，主要因为现代科学和生物技术的发展日新月异，而相关科学普及未能及时跟上，许多公众对基因、转基因食品、转基因生物安全等知识不了解，一些人担心疑虑在所难免，也可以理解。 但是现在经常在报纸、杂志、电视和各种媒体上看到关于转基因作物特别是转基因食品的安全性，这是争论议论的热点话题，原因很多，但其中大多数没有科学依据，更多的是利益之争和不明真相。 变成猪八戒 药品疲废止

GMO食品安全评价内容 转基因来源生物的安全性 受体生物的安全性 转基因操作的安全性 转基因植物的分子特征 转基因植物的遗传稳定性 营养成分和抗营养因素 毒性蛋白和过敏蛋白质 暴露风险安全性 标记基因的安全性 对人类的长期非预期效应

第七章 食源性致病菌检测 一 食源性致病菌检测现状 1 食源性致病菌简介 2 食源性致病菌检测现状 二 食源性致病菌检测技术进展 三 食源性致病菌毒理学 1 诱导细胞氧化损伤 2 食源性致病菌毒素致癌可能机理 四 食品安全检测研究的理性思考

一 食源性致病菌检测现状 1 食源性致病菌简介 细 菌 名 称 常 见 来 源 临床症状或疾病 1 细 菌 名 称 常 见 来 源 临床症状或疾病 1 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） ATCC 29213 奶、肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品（包括奶制作的饮料、冷饮、糕点，熟肉、肉制品罐头等）；剩饭、油煎蛋、糯米糕、凉粉、剩大米和米酒等。 1.侵袭性疾病：引起化脓性感染，如伤口化脓、蜂窝织炎，肺炎、脑膜炎、心包炎，败血症等。2.毒素性疾病：食物中毒症状表现为头晕、恶心、腹泻、呕吐等急性胃肠炎症状，毒素休克综合症表现为高热、低血压、腹泻、皮疹、休克。 2 大肠杆菌O157:H7 (E.coli O157:H7) 食品或食品原料被粪便污染，与生牛肉、鲜牛奶或以鲜奶为原料加工的乳制品、未经巴氏消毒的果汁饮料、水果、蔬菜及其制品。 症状轻重不一，轻度水泻、伴剧烈腹痛的血便、急性肾衰、血小板减少、溶血性贫血、溶血性尿毒综合症。 3 志贺氏菌（Shigella）ATCC 920 Shigella boydii 肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品，瓜子仁。 细菌性痢疾，急性：发热、腹痛、里急后重，有时表现为全身中毒症状为中毒性痢疾，治疗不彻底转为慢性。 4 沙门氏菌（Salmonella） 鲜肉、冻肉、鲜蛋、鲜乳或其加工制品或其他未加工食品。 肠道致病菌，引起人类伤寒、副伤寒、感染性腹泻、食物中毒和医院内感染及动物沙门氏菌病。 5 鼠伤寒沙门氏菌（ S. typhiumukriunm ）ATCC 14028 家禽( 鸡、鸭、鸽等)、家畜(猪、牛、羊、马、狗、猫等)、鼠类和飞鸟肉品尤其是肠道。 引起人类急性胃肠炎。 6 猪霍乱沙门氏菌（ S.choleraesuis ） 生猪肉、生肝等。 致病性最强的人畜共患病，可一起霍乱。 7 肠炎沙门氏菌（ S.enteritidis ） 家禽等肉制品。 引起人类急性胃肠炎，导致败血症。 8 副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus） 鱼类、贝类、腌渍蔬菜及肉蛋类食品。 引起食物中毒和急性腹泻、腹部痉挛、恶心、呕吐、头痛、发烧、畏寒、严重时败血症。 9 肉毒梭状芽孢杆菌 （Clostridium botulinum） 烟熏、腌制、盐渍或灌装食品(鱼类、香肠、肉类及水果蔬菜)、发酵豆制品（臭豆腐、豆瓣酱）、发酵面制品（甜面酱）。 1.食物中毒：神经末梢麻痹，乏力、头痛、斜视、眼睑下垂、吞咽困难、膈肌麻痹、呼吸困难、死亡。2.婴儿肉毒病：便闭、吸乳、啼哭无力。 10 腊样芽孢杆菌 （Bacillus cereus）ATCC 11778 有 碳水化合物和蛋白质含量丰富的食品如米饭、点心、奶制品、肉类、调味品。 1.呕吐型：恶心、呕吐、少有腹泻。2.腹泻型：腹痛、腹泻、偶有呕吐和发热。 11 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes）ATCC 7644 有 牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。 孕期感染、新生儿脓毒血症、脓毒症、脑膜炎、局部感染五型：畏寒、发热、背痛、头痛、血尿。 12 阪崎肠杆菌 （Enterobacter sakazakii） 婴儿奶粉。 新生儿败血症、脑炎、坏死性小肠炎，成人骨髓炎。 13 溶血性链球菌（Hemolytic Streptococca）l 奶、肉、蛋及其制品。 皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。 14 小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica） 野生动物、家畜(猪、狗和猫)、牡蛎和水源，健康人或患者粪便、冷库肉食品，其产生的毒素能忍耐以上高温。 引起腹泻与肠外疾患，是近年来最受关注的肠道致病菌。

2 食源性致病菌检测现状 * 国标框定的经典、繁琐的生化鉴定，维系我国食品微生物检测长达数 十年。自1953年卫生部制订酱油中砷含量的国家标准以来，迄今我国共制订各种食品标准多达500余项。

化学测定 国家标准 行业标准 地方标准 分子或免疫学测定 生物测定 生化测定

存在问题： 1 标准规定方法繁琐、流程长、消耗大，严重制约了抽检率、检测量的提高。 2 致病菌检测流于形式。 3 新型、快速、高通量检测技术严重匮乏，和西方国家差距巨大。 在国家食源性致病菌监管部门、食品企业，90%以上采用标准方法检测，而美国80年代已经普及新型分子、免疫学检测技术，被欧美国家整整晚了20年。

现实情况 2006-2010年食源性疾病暴发资料进行分析，结果显示，5年间，共收到食源性疾病暴发事件报告2023起，累计发病62920人，死亡967人，其中微生物引起的食源性疾病暴发事件数和患者数最多，分别占40.09%和61.92%。 中国疾控中心毛雪丹博士等研究人员通过分析2003-2008年中国细菌性食源性疾病监测结果，推算出当时监测漏报率为99.992%。

世界卫生组织统计，60-70%食品安全事故来源于生物污染！ # 2011年10月19日“思念”三鲜水饺检出金黄色葡萄球菌 # 11月7日，三全白菜猪肉水饺也检出金黄色葡萄球菌 # 11月17日，湾仔码头上汤小云吞也检出金黄色葡萄球菌。 三大冷冻食品品牌陷“细菌门”！ 2012年2月，蒙牛强致癌物，黄曲霉毒素，真菌毒素，细菌毒素 政府及市场暗示：食源性致病菌，将是下一个食品安全热点问题！

二 食源性致病菌检测技术进展 1 基于分子生物学技术的快速检测技术 PCR及衍生技术 ①PCR 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。

②Direct-PCR 不用核酸提取的PCR技术，直接将细胞加入到PCR体系，通过高温裂解细胞释放核酸作为模版，进行PCR扩增。

③Nested-PCR 即巢式PCR，是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。 在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的模板很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。

④BIO-PCR 平板富集之后挑取可疑菌落的PCR。

⑤膜捕获PCR 利用硝酸纤维素对蛋白的高吸附性，将样品中的细菌吸附后洗脱（或者扩繁）后，进行PCR扩增。

⑥膜过滤PCR 0.22微米微孔滤膜过滤富集细菌后的PCR。

⑦反转录PCR(reverse transcription, RT- PCR)当扩增模板为RNA时, 需先通过反转录酶将其反转录为cDNA才能进行扩增。 另外：反向PCR( Inverse PCR, IPCR)技术、锚定PCR(Anchored PCR, APCR)、不对称PCR(asymmetric PCR)、修饰引物PCR技术、等位基因特异性PCR(Allele- specificPCR, ASPCR)、单链构型多态性PCR(single- strandconformational polymorphism PCR, SSCPPCR)、低严格单链特异性引物PCR (Lowstringencysingle specific primer PCR, LSSP- PCR)、复合PCR(multiplex PCR)、重组PCR技术。

LAMP ：2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。

2 基于免疫学的快速检测技术 ① ELISA

②Western blot

③ Immunostainning

④免疫捕捉PCR(Imunocapture-PCR, IC-PCR) 加入检测样品 弃去残余样品 洗涤 PCR扩增

⑤免疫磁珠分离PCR(Immunomagnetic separation-PCR, IMS-PCR 将抗体包被于磁珠上，形成免疫磁珠 将免疫磁珠加入到检测样品中，进行富集浓缩病原 洗涤 裂解释放DNA PCR扩增

3 基于芯片技术的食源性致病菌检测 生物芯片，又称DNA芯片或基因芯片，它们是DNA杂交探针技术与半导体工业技术相结合的结晶。该技术系指将大量探针分子固定于支持物上后与带荧光标记的DNA样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。

①基因芯片

②蛋白芯片：“可视化抗体联检抗体芯片” 核心技术：通过宏阵列实现的真正的可视化， 无交叉反应的联合检测。 创新点：可视化 ，多指标同步联检 ，快速检 测。 可视化蛋白芯片 设备读取蛋白新片 优点：1 “可视化”，检测结果肉眼可见；2 “高 通量”，同步实现单样品多指标检测；3 “超灵 敏”，检测灵敏度达到104-105cfu/ml；4“平民 化”，普通实验室即可开展工作；5 “傻瓜型”， 普通技术人员即可操作；6 “低成本”，检测成 本是国标检测的十分之一；7 “高特异性”，芯 片所用抗体，经过2年筛选，确保检测的特异 性；8 “超快速”，所有检测可在2.5个小时完成。 产品设计：单孔、三孔、24孔。

③ 芯片实验室（Lab-on-a-chip） 或称微全分析系统（Micro Total Analysis System， or microTAS）是指把生物和化学等领域中所涉及的样品制备、生物与化学反应、分离检测等基本操作单位集成或基本集成于一块几平方厘米的芯片上，用以完成不同的生物或化学反应过程，并对其产物进行分析的一种技术。

微流控芯片 在数字化微流芯片上进行实时荧光定量PCR，将液滴在极短的时间（小于一秒钟）内在芯片上移到任何一个位置。而如此小的液滴（小于一微升）的温度会在0.1秒以内和它接触的芯片达到平衡。也就是说，如果我们将芯片分区加热并保持在3个不同的温度区域——55℃、72℃、和95℃，我们可以将样品液滴在一秒钟之内改变到PCR反应的任何温度，整个实时荧光定量PCR检测可在十分钟之内完成。

④ 液相芯片 一种芯片技术与流式细胞术相结合的新技术。即将DNA、抗体等附着于微球表面作为探针，在液相中与待测物结合，再加入荧光标记的报道分子，借助流式细胞仪检测微球表面荧光标记物。 液相芯片体系由许多大小均一的圆形微球（直径5.5～5.6 μm）为主要基质构成，每种微球上固定有不同的探针分子，将这些微球悬浮于一个液相体系中，就构成了一个液相芯片系统，利用这个系统可以对同一个样品中的多种不同分子同时进行检测，这种被称之为xMAP的检测技术是1997年由美国Luminex公司开发出来的。

4 基于各种传感器的食源性致病菌快速检测技术 量子点：量子点(quantum dot)是准零维(quasi-zero-dimensional)的纳米材料，由少量的原子所构成。粗略地说，量子点三个维度的尺寸都在100纳米(nm)以下，外观恰似一极小的点状物，其内部电子在各方向上的运动都受到局限，所以量子局限效应(quantum confinement effect)特别显著。

电化学—纳米金传感

5 适配子技术 (aptamer) 是通过SELEX体外筛选技术获得的具有识别能力的单链核酸分子

6 基质复印技术(substrate imprinting technique)

三 食源性致病菌毒理学 1 食源性致病菌诱导细胞氧化损伤 氧化损伤 肿瘤发生

Data from Dr.Liu’s Lab

Data from Dr.Liu’s Lab

NADPH oxidase as a promoter of ROS production

H2O2

Fig.3 C HepG2/ gp91phox/p47 phox Data from Dr.Liu’s Lab

Data from Dr.Liu’s Lab

Data from Dr.Liu’s Lab

2 食源性致病菌毒素与肿瘤发生 黄曲霉毒素 赭曲霉毒素 赭曲霉毒素 肠毒素 玉米赤霉烯酮 玉米赤霉醇 ROS

★ ROS通过调节NB调控PML（Promyelocytic leukemia protein， 早幼粒细胞白血病蛋白）等肿瘤相关基因。 PML：apoptosis, transcriptional regulation, and DNA repair. Histone deacetylase (HDAC)

ROS damage to PML 17h treatment Ctr 50 µM 100 µM 200 µM 400 µM Data from Dr.Liu’s Lab

H2O2 to PML Ctr 1 h Ctr 2 h Ctr 3 h 4 h Ctr Data from Dr.Liu’s Lab

PML 1 overexpression PML single stain PML 1 overexpression HDAC7 single stain Data from Dr.Liu’s Lab

Data from Dr.Liu’s Lab

Data from Dr.Liu’s Lab

第一次 1 动植物检疫审批的目的意义是什么？ 2 动植物检疫的依据是什么？ 3 入境动物审批、过境动物审批的主要区别在哪里？ 4 某公司想从澳大利亚进口一批奶牛，需要去哪里办理哪些审批手续？ 第二次 1、常见的动植物检疫对象有哪些? 2、常用的动植物检验检疫名词有哪些，含义是什么？ 第三次：PCR的五个循环示意图 第四次：1、elisa示意图         2、问答题 ：①什么是单克隆抗体，什么是多克隆抗体？ ②什么是抗原？什么是抗原的免疫应答性，什么是抗原的免疫反应性？ 特别注意： 1 根据同学反应的情况看，作业按照缴纳此处统计确实欠妥，比如有些同学虽然只缴纳一次作业，但是把所有作业都做了，有些同学缴纳了电子版本，同时又缴了纸质版本，这样就会重复统计，因此，最终作业统计，将按照以上作业是否全部完成来统计，请核对作业，若和我统计的有出入，请尽快发邮件给我以便纠正，谢谢！ 2 请大家再次核对课堂考勤，看是否有出入，下节课将最终确定。

教学效果评估问卷： 1 你觉得动植物检疫学这门课有收获吗？如果有，都有哪些收获？如果没有，你觉得主要原因在哪里？ 2 你觉得老师课堂讲解有哪些问题？老师哪些方面需要改进？ 3 你觉得应该如何给同学们上动植物检疫学这门课？你对这门课教学的建议和意见有哪些？ 5 任何关于此门课程教学的建议和意见。 此教学评估问题，仅仅是为了后期教学改进，请同学们协助完成，此评估完全匿名，请同学们畅所欲言。以上问题，写在一张纸上，由班长在本节课结束前收缴给我，谢谢！

第八章 检验检疫结果判定及处理 一 检验检疫结果判定 二 检疫除害处理

一 检验检疫结果判定 合格、不合格、结果存疑，重新抽检 合格：签发检测报告、放行单及其它进出口手续。 不合格：除害处理 销毁 结果存疑重新抽检：重新取样检测。