血清(浆)脂类及脂蛋白测定 ——董雷鸣
血脂的组成: 甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸(游离脂肪酸)等
血脂的运输形式—脂蛋白 1、定义: 指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。
2、结构: 磷脂 胆固醇 载脂蛋白 表面 脂蛋白微粒 甘油三酯 胆固醇酯 核心
3、分类 (1)按密度不同 HDL LDL IDL VLDL CM
(2)按电泳时区带的泳动位置不同 α -LP 前β-LP β-LP CM + CM β-LP 前β-LP α -LP CM HDL VLDL
临床血脂测定的常见项目:
磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 实验51: 磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)
实验原理: 提取HDL 测定胆固醇
提取HDL的方法: 超速离心法 层析法 电泳法 ☆沉淀法
沉淀法原理: ApoB + 多阴离子化合物 沉淀↓
多阴离子(polyanion)化合物 硫酸葡聚糖--Mg2+ 肝素--Mn2+ 磷钨酸--Mg2+
胆固醇测定(酶法): 过氧化物酶 胆固醇 + O2 胆甾烯酮 + H2O2 H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 亚胺醌 + H2O
试剂: 沉淀剂 酶试剂 参考血清(TC测定用的定值血清)
操作步骤: 1、提取HDL 取血清和沉淀剂各200μl,充分混匀,置室温放置10min后,2500r/min,15min,吸取上清液按表进行操作。
2、测定胆固醇 混匀,37℃水浴15min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。 加入物(μl) 空白管 标准管 测定管 上清液 — 50 参考血清 蒸馏水 酶试剂 2000 混匀,37℃水浴15min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。
计算: 参考值: 定值血清胆固醇浓度 测定管吸光度 5.17 HDL-C (mmol/L) × = 标准管吸光度 2
注意事项: 1、血清标本要及时测定 ——(在室温条件下,各型脂蛋白之间会发生脂质交换); ——(游离的胆固醇会不断酯化)。 2、离心过程中防止温度过高(室温15~25℃),离心后放置时间不能过长。 ——(温度过高使沉淀不完全)。
临床意义: 具有抗动脉粥样硬化作用,是冠心病的保护因素。
实验49: 磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯(TG)
甘油三酯(TG)的结构:
甘油三酯测定的方法: 化学法 酶法
化学法 (KOH) (过碘酸) 抽提 甘油 甲醛 显色 皂化 氧化
甘油 甲醛 甘油三酯 紫红色 变色酸
☆酶法(磷酸甘油氧化酶法) 亚胺醌 + H2O 甘油三酯 甘油 + 脂肪酸 + ATP 3-磷酸甘油 + ADP O2 、H2O + LPL 甘油三酯 甘油 + 脂肪酸 GK + ATP 3-磷酸甘油 + ADP O2 、H2O + GPO 磷酸二羟丙酮 + H2O2 +酚、4-氨基安替比 POD 亚胺醌 + H2O
试剂: 酶试剂 2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液
操作: 37℃水浴10min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。 加入物(μl) 空白管 标准管(×2) 测定管(×2) 上清液 — 20 参考血清 酶试剂 2000 37℃水浴10min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。
计算: 参考值: TG (mmol/L) 测定管吸光度 = × 标准液浓度 标准管吸光度 2.26mmol/L
临床意义: 增高: 与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。 降低: 营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。
注意事项: 标本: 标本要求是餐后12-14h的空腹血液 ——(血清TG易受饮食影响)。 标本存放不宜超过3天 试剂: 酶试剂应4℃避光保存,出现红色不可再用 。
免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B 实验53: 免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B
原理: ApoA1 ApoB ApoA1抗体 ApoB抗体 抗原 + 抗体 抗原抗体复合物 比色
临床意义: ApoA1 与高脂血症、冠心病呈负相关; ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。