第八章 病原学诊断 细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
细 菌 学 诊 断 Diagnosis of bacteria
血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。 细菌学诊断 病原菌检测 病原菌抗原检测 其他检测法：PCR等 细菌学诊断：以检测病原菌及其抗原、产物 或核酸为目的。 血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
病原菌检测 标本采集与送检的原则 病原菌的检测方法 细菌学诊断 区别取材 无菌操作 用抗生素之前 尽快送检、妥善保护 做好标记 细菌形态与结构检查 分离和鉴定 显微镜放大法 染色法——革兰染色法
革兰染色（Gram stain） 细菌学诊断 方法 涂片 干燥 固定 染色： 初染：结晶紫 媒染：碘液 脱色：95%酒精 复染：沙黄
细菌学诊断
细菌学诊断 革兰染色（Gram stain） 原理：细胞壁结构 用途: 鉴别细菌 选择用药 了解细菌致病性
细菌学诊断 抗酸染色 原理：分枝杆菌的细胞壁结构特点。 用途：分枝杆菌的鉴定 方法 初染：石炭酸复红 脱色：3%盐酸酒精 复染：碱性美兰
分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。 细菌分离和鉴定 细菌学诊断 分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。
标本 观察菌落性状、溶血性、色素——初步鉴别 致病菌的检验程序 细菌学诊断 标本 观察菌落性状、溶血性、色素——初步鉴别 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 血清学鉴定 普通琼脂平板 血平板 选择培养基 分离培养
致病菌的检验程序 标本 培养特征 形态特征 普通琼脂平板 血平板 选择培养基 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
细菌学诊断
细菌学诊断
细菌学诊断
病原菌抗原的检测 细菌学诊断 优点： ①不受抗生素使用的限制； ②敏感性高。 免疫学技术: 沉淀试验 ELISA 免疫荧光等
血清学诊断 适用于抗原性较强、病程较长的传染病诊断 取双份血清（隐性感染或者疫苗接种） 血清抗体效价受多种因素影响 直接凝集试验（肥达试验） 细菌学诊断 用已知抗原检测患者血清中未知抗体及其量的变化—— 辅助诊断方法 适用于抗原性较强、病程较长的传染病诊断 取双份血清（隐性感染或者疫苗接种） 血清抗体效价受多种因素影响 诊断方法 直接凝集试验（肥达试验） 中和试验 ELISA
病 毒 学 诊 断 Diagnosis of virus
病毒学诊断 标本采集与转运 急性期标本； 根据感染性质取不同的标本； 标本置于转运液中； 冷藏快运。
病毒感染的实验室诊断方法
病毒分离培养 方法 应 用 价 值 存 在 问 题 动物接种 应用最早； 方法简便； 结果易于观察 自身带病毒； 有的接种后不敏感； 应 用 价 值 存 在 问 题 动物接种 应用最早； 方法简便； 结果易于观察 自身带病毒； 有的接种后不敏感； 动物饲养问题 鸡胚培养 来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种 敏感病毒谱窄 细胞培养 应用广泛，敏感病毒谱广 设备技术要求条件高
识别病毒在培养细胞中增殖的方法 （1）细胞的变化 细胞病变效应（CPE）： 病毒感染细胞后，可出现细胞圆缩、裂解或细胞肿大、数 包涵体 个细胞融合成多核巨细胞等。 包涵体
epithelial cells - adenovirus uninfected early infection late infection slides from CDC
（2）红细胞吸附： （3）干扰现象 （4）pH改变
病毒数量与感染性测定 蚀斑测定： PFU（空斑形成单位） TCID50与ID50 病毒量：Pfu/ml 用于病毒浓度的精确定量 概念：病毒感染鸡胚、动物与细胞后，引起50%死亡或病变的最小病毒量。
病毒感染的血清学诊断 病毒学诊断 原理： 应用： 常用实验： 中和实验 血凝抑制实验
病毒学诊断 病毒感染的快速诊断 形态学检查： 病毒蛋白抗原检查： 特异IgM检测： 病毒核酸检测：
形态学检查 电子显微镜： 直接观察病毒 光学显微镜： 观察病毒的包涵体
病毒蛋白抗原的检测 1、免疫荧光技术 2、ELISA 3、免疫印迹试验 4、放射免疫法
真 菌 学 诊 断 Diagnosis of fungi
一、病原性真菌的检查与鉴定 直接镜检：
分离培养： －常用培养基 沙保（Sabourud）培养基 培养方法： 一般培养 小培养 动物实验 皮肤超敏反应实验
二、真菌快速诊断 血清学实验： 核酸检测： 真菌毒素检测：