医学微生物学 实验四
主要内容： 录像（肠道杆菌分离与鉴定) 肠道杆菌形态、培养特性及生化 反应 粪便标本分离与鉴定 肥达氏反应
一、肠道杆菌形态、培养特性及生化 反应 大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌 2. 培养（中国兰平板） 大肠杆菌、变形杆菌、伤寒杆 1. 形态: 大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌 2. 培养（中国兰平板） 大肠杆菌、变形杆菌、伤寒杆 菌、乙型副伤寒杆菌、痢疾杆菌
3. 生化反应： （示） 双糖铁基培养基 尿素培养基 蛋白胨水培养基
双糖铁基培养基 固体斜面培养基 半固体培养基
成分： 硫酸亚铁铵 硫代硫酸钠 乳糖 酚红 H2S试验 乳糖发酵试验
成分： 琼脂(0.35%)(动力观察) 蛋白胨水 葡萄糖 酚红 葡萄糖发酵试验
3. 生化反应： （示） 双糖铁基培养基 尿素培养基 蛋白胨水培养基
尿素培养基 ★ 成份：20%尿素水溶液 0.6%酚红溶液 ★ 原理 尿素酶分解尿素产氨气
二、肠道杆菌分离鉴定步骤
细菌检查常用的鉴定方法： 镜检（ G+球菌） 培养（ G+球菌） 生化反应（ G-杆菌） 血清学诊断 动物实验 核酸诊断等快速诊断
二、肠道杆菌分离鉴定步骤 兰色、较大、不透明菌落----- 大肠菌 无色、较小，半透明菌落----- 致病菌 1.粪便→中国兰平板 兰色、较大、不透明菌落----- 大肠菌 无色、较小，半透明菌落----- 致病菌 2.生化试验： 双糖铁基、尿素、吲哚 3.血清诊断
三、肥达氏反应 1.原理： 根据凝集反应的原理，用已知的标准菌液（伤寒杆菌菌体及鞭毛抗原，甲型副伤寒 杆菌鞭毛抗原及乙型副伤寒杆菌鞭毛抗原）测定病人血清中有无相应抗体存在，以协助伤寒，副伤寒病的诊断。
2.抗原：伤寒菌“O”、伤寒菌“H”、 副甲“H”、副乙“H” 3.方法
1:2560 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 O抗原 伤寒H抗原 副甲H抗原 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 副乙H抗原
4.凝集判断（上清液、沉淀） “＋＋＋＋”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。 “＋＋＋”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。 “＋＋”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。 “＋”：弱，少量凝集，液体浑浊。 “－”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。
+++ ++++
++ +++ —
++++ —
++++ +++ —
5、凝集效价 能出现明显凝集（++）的血清最高稀释度 例： 测定某病人O凝集效价结果如下： 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 ++++ +++ +++ ++ ++ + --
6.结果分析 正常抗体水平 O与H抗体在诊断上的意义： H抗体 O抗体 IgM IgG