无菌操作技术 07工业环保与安全技术

要求：具备无菌操作意识！ www.themegallery.com Company Logo

无菌技术操作原则 （一）操作前准备 1：无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面，减少走动，以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、宽敞。 2：操作者应修剪指甲，洗手，戴好帽子、口罩，必要时穿无菌衣、戴无菌手套。 www.themegallery.com Company Logo

无菌技术操作原则 （二）操作中保持无菌 1：工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上，不可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、打喷嚏。 2：用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用，防止交叉感染。 3：无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用，应予更换或重新灭菌 www.themegallery.com Company Logo

无菌技术操作原则 （三）无菌物品保管 1：无菌物品和非无菌物品应分别放置。 2：无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内，无菌包外要注明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 3：定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下，保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。 www.themegallery.com Company Logo

涉及操作过程 实验用具和培养基的灭菌 接种 www.themegallery.com Company Logo

小结 灭菌与消毒： 实验中所用于培养的培养基和接种等用到的器具都需要进行灭菌，灭菌的方法常用的有高压蒸汽灭菌和干热灭菌。 接种时，手需要用70%酒精消毒，接种环或接种针需要灼烧灭菌。接种时，保持在火焰周围（火焰周围5cm处）。 用于微生物培养与接种的区域需要用紫外灯进行杀菌。 www.themegallery.com Company Logo

小结 无菌操作： 微生物在环境中普遍存在，因此在实验室环境中，如果需要对某一特定微生物进行纯培养，则需要尽量排除其他微生物的影响。如在培养基配制时选择专一性较高的培养基，培养基中添加抗生素，培养条件的控制等。而接种操作和培养过程更是严格要求无菌，避免污染。 www.themegallery.com Company Logo

无菌操作基本技术 www.themegallery.com Company Logo

高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌法 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅内，加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。 www.themegallery.com Company Logo

原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 www.themegallery.com Company Logo

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操作流程 1.检查灭菌锅（清除锅内杂物） 2.加水（加之刻度处，不能少也不需多） 3.放入待灭菌物（不能太拥挤，盖上锅盖是，对角线旋紧螺丝） 4.接通电源（插座电源和灭菌锅电源同时打开） 5.放气（排除空气，知道有持续蒸汽排出为止） 6.升压（关掉排气阀门，使压力指针升至1.05kg/cm2 ，121℃） 7.保持（控制电源开关或者设定程序保持在121℃，30min） 8.降压（关电源） 9.烘干（等压力降至0.5kg/cm2以下后，打开螺丝，让锅盖移出部分空隙，让蒸汽烘干锅内物） 10.取物（若发现包装被破坏，则需重新灭菌） 11.放水 www.themegallery.com Company Logo

WARNING警告: 一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 危险物品清单： 1.爆炸物质 2.可燃性物质 3.氧化剂 4.易燃物质 www.themegallery.com Company Logo

WARNING警告: 二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会腐蚀容器和管道。 三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下。 四．绝对不许擅自改造这个产品。 五．不要在爆炸性气体附近使用该仪器。 www.themegallery.com Company Logo

干热灭菌 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170 ℃ ）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180 ℃ ； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70℃时才开箱门。 www.themegallery.com Company Logo

湿热灭菌法 干热灭菌法 干热消毒法和湿热消毒法效果比较 导热速度 慢 快 穿透力 弱 强 消毒时间 长 短 所需温度 高 低 破坏性 大 小 www.themegallery.com Company Logo

过滤除菌 过滤除菌原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。需 大量无菌空气以及净化工作台。 注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。 www.themegallery.com Company Logo

辐射消毒法 最佳杀菌波长：253.7nm 有效距离：物品：25～60cm, 空气：＜2m 照射时间：灯亮 5～7min后开始计算， 紫外线灯管消毒法 最佳杀菌波长：253.7nm 有效距离：物品：25～60cm, 空气：＜2m 照射时间：灯亮 5～7min后开始计算， ＞30min 适用：室内空气、物体表面 特点：简单、方便、无损物品 类型：悬吊式、移动式、屏幕式 www.themegallery.com Company Logo