微生物学实验 实验目的 实验要求 实验内容和安排 考核方案

实验目的： 使学生能较熟练的掌握研究微生物的基本方法和微生物操作的基本技能。为今后开展微生物学的研究工作和生产应用奠定良好的基础。 1 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能 2 使学生加深和巩固对微生物基本理论知识的理解 3 培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力 4 培养学生实事求是、严肃认真的科学态度    

实验要求： 为了保证实验课的质量和提高实验效果，要求学生做到： （一）每次实验课前必须对实验内容进行充分的预习，明确试验目的、内容、原理及操作中注意的事项，以保证实验的进度和效果 （二）认真执行微生物学工作中的无菌操作规程，切实按照实验直到所列的实验步骤，循序进行各项操作，以确保实验安全和获得预期效果。 （三）实验时注意科学的分配和运用时间，在规定时间内保质保量地完成各项实验内容。 （四）按规定时间检查实验结果时，必须按照实事求是地进行观察，记录下实验的现象与结果，并进行分析，得出结论。若遇有理论不符的结果时，应探究其原因，以培养科学思维能力。 （五）每次实验完成后，按作业要求写出实验报告。文字力求简明准确，绘图力求真实，图标力求简洁明了。

实验内容和安排： 1 微生物实验常用玻璃仪器洗涤及干热灭菌（3学时） 2 培养基的制备和灭菌（4） 3 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术（3） 4 微生物菌落的观察（3） 　 5 显微镜的使用和细菌的运动性观察（3）  6 细菌的单染色和革兰氏染色（3） 7微生物的显微镜计数与酵母菌的死活鉴别染色（3） 8微生物细胞大小的测定（3） 9水中大肠菌群数量的测定 （3） 　 10 牛奶酸败与乳酸饮料发酵（4）

考核方案 1、评定成绩坚持公正、真实、科学的原则。 2、实验成绩：实验报告成绩占70% 。 3、旷课达1/3的或故意损环仪器者判为不及格。 实验考勤占30％。 3、旷课达1/3的或故意损环仪器者判为不及格。

实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌 目的要求 实验原理 实验材料 实验程序 结果与思考题

一、目 的 要 求 认识微生物实验所需要的各种器皿，了解常用工具和仪器的名称、用途。 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干热灭菌的操作过程。

二、实验原理 微生物学实验要求较高的无菌状态，因此，实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌.

干热灭菌的原理 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。

三、实 验 器 材 玻璃仪器： Ａ每人: 培养皿 4套； 大试管 4只。 Ｂ每组：三角瓶 5只； 烧杯（500ml）1只； 三、实 验 器 材 玻璃仪器： Ａ每人: 培养皿 4套； 大试管 4只。 Ｂ每组：三角瓶 5只； 烧杯（500ml）1只； 烧杯（1000ml）1只； 中试管 7只； 吸管（ 0.5ml 3支，5ml 2支）共5支 洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。 包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。

四、实验步骤 1、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围： 2、学习玻璃器皿的洗涤方法： 3、学习各种器皿的包扎： ①培养皿； ②试管； （一） 仪器的认识、清洗与包扎 1、学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围： ①培养皿； ②试管； ③三角瓶； ④烧杯； ⑤吸管； ⑥量筒。 2、学习玻璃器皿的洗涤方法： 3、学习各种器皿的包扎：

由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径90 mm，高15 mm，皿底皿盖均为玻璃制成。 制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。

根据其大小和用途不同，有下列三种型号： (1)大试管(约18mm×180mm) : 可装倒平板用的培养基; 可作制备斜面用（需要大量菌体时用） 装液体培养基用于微生物的振荡培养。 (2)中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用, 用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 (3)小试管[(10～12)mm×100mm]: 一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。

三角瓶: 100mL、250mL、500mL和1000 mL 烧杯: 玻璃吸管: 0.2mL、0.5mL、 1mL、 5mL、10mL 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等. 烧杯: 50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用来配制培养基与各种溶液等。 玻璃吸管: 0.2mL、0.5mL、 1mL、 5mL、10mL

玻璃器皿的洗涤方法: 1、新玻璃器皿的洗涤 在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。 2、旧玻璃器皿的洗涤 （1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗 装有固体培养基：刮掉，洗涤 带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤 （2）玻璃吸管：吸管尖端对着水流，反复冲洗 吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。 塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时然后洗 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗 洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。 洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上,晾干.

培养皿的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包 吸管的包扎： 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。 2 4～5 cm宽的长纸条. 试管和三角瓶等的包扎

程序Ⅱ（干热灭菌） 1．装入待灭菌物品 2．升温 3．恒温 4．降温 5．开箱取物 将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。注意物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 2．升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度（160～170℃）位置。 3．恒温 当温度升到所需温度时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。注意不可再拨动调节旋钮和通气孔 。 4．降温 切断电源、自然降温。 5．开箱取物 待电烘箱内温度降到60℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。同时，将温度调节旋钮调到零点，并打开通气孔。

结果与思考题 1、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 2、简述干热灭菌的操作步骤。