实验二 尿蛋白定性检查
一、磺基水杨酸法 【目的】 掌握尿蛋白定性磺基水杨酸法。 【目的】 掌握尿蛋白定性磺基水杨酸法。 【原理】 生物碱试剂磺基水杨酸,在酸性条件下,其磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合,形成不溶性蛋白盐沉淀。
【操作】 1.调pH 2.加尿液 3.加试剂 4.判断结果
【注意事项】 1 .标本:①如果尿液呈现明显的混浊,应先离心或过滤。②当获知患者应用大剂量青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂时,应告知结果可能产生假阳性。③指导患者正确采集中段尿,避免混有生殖系统分泌物。 2. 调pH 本法在尿液偏碱或偏酸时(pH>9 ,pH<3)可呈假阴性,因此检测前可先测试尿pH,必要时用稀NaOH或5%醋酸进行调节。 3.掌握好结果判断时间。如果通过镜检发现阳性是由于混有生殖系统分泌物造成的,有可能是假阳性,可用离心后上清液再检测进行验证。对于微弱阳性的判断,可选用黑色衬纸作背景,以提高分辨力。 4.本法灵敏度高,为0.05~0.10g/L。
二、加热乙酸法 【目的】 掌握尿蛋白定性加热乙酸法。 【目的】 掌握尿蛋白定性加热乙酸法。 【原理】 蛋白质遇热变性,加稀乙酸使尿液pH减低并接近蛋白质等电点(pH 4.7),使得变性凝固的蛋白质进一步沉淀。同时,稀乙酸还可消除因加热引起的磷酸盐或碳酸盐析出所造成的浑浊。
【操作】 1.加尿液 2.加热 3.加酸 4.再加热 5.判断结果
【注意事项】 1.标本要新鲜,陈旧尿液因大量细菌生长或引起假阳性。尿液呈现明显的混浊,应先离心或过滤。正确采集中段尿,避免混有生殖系统分泌物。对于限盐或无盐饮食的患者,由于离子强度太低,需在尿液标本中滴加饱和氯化钠溶液l~2滴后再进行检测。 2.加入的乙酸量要适当,约为尿量的1/10。 3.操作一定要遵循加热→加酸→再加热的程序。 4.加热后立即直立试管观察结果。试管中上l/3段尿液进行加热为检测区,下段尿液未加热作为对照区。 5.本法灵敏度为150mg/L,是最经典、最准确的方法,但操作略显繁琐,常作为蛋白定性的确证试验。