实验三 微生物的培养(二)、细菌对抗菌药物的敏感试验 医学微生物学实验 实验三 微生物的培养(二)、细菌对抗菌药物的敏感试验
实验内容： 1.微生物的培养(二) －－－非常规细菌的培养： （1）专性厌氧菌的培养 （2）细菌-L型的培养 2.细菌对抗菌药物的敏感试验 3.皮肤、咽部细菌的培养
1.微生物的培养(二) *非常规细菌的培养： 专性厌氧菌的培养 细菌-L型的培养
示教：厌氧袋、厌氧罐，焦性没食子酸法，庖肉培养基 （1）专性厌氧菌的培养 生物学方法：如疱肉培养基(培养基中的肉渣含有不饱和脂肪酸及谷 胱甘肽，能吸收培养基中的氧气，降低其氧化还原电势 )。 物理学方法：如厌氧缸法(用抽气换气法抽出缸内的空气，充入氮气 或者二氧化碳，使缸内造成厌氧环境) 。 化学方法： 焦性没食子酸法:焦性没食子酸加碱性溶液能迅速而大量的吸收氧， 生成深棕色的焦性没食子橙，是有效的化学除氧方法 厌氧袋法：如冷触媒法：利用气体发生器产生氢及二氧化碳，产生的 氢在触媒作用下，与罐内的氧结合成水，将氧消耗掉，造成无 氧环境。产生的二氧化碳约为10％，也适宜厌氧菌生长。方法 为：先将触媒(金属钯或铂)及美蓝指示剂放入罐内，然后将已 接种的平板置于罐内，将气体发生袋的指定角剪开，加入lOml 水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。 示教：厌氧袋、厌氧罐，焦性没食子酸法，庖肉培养基
（2）细菌L型的培养 细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用 高渗的含血清的培养基。菌落多呈油煎蛋状。
示教：L－型菌落
2.细菌对抗菌药物的敏感试验 细菌对抗菌药物的敏感试验（简称：药敏）是体外测定细菌对临床抗菌药物的敏感性的试验，细菌对抗菌药物的敏感试验不属于病因诊断范畴，但在分离出病原菌和鉴定后，对指导临床选择用药、及时治疗和控制耐药菌感染有重要意义。 不同的菌种或菌株，对同一药物的敏感性不同；同一菌种或菌株，对不同的药物的敏感性亦不同。
药敏试验中所用的专用名词 （1）敏感（sensitive）：指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。 （2）中度敏感（moderate sensitive）：指通过提高某种抗菌药物的剂量或在该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染被治愈。 （3）中介度（intermediate）：这一范围是“缓冲域”，是由操作上的误差造成的，不作为报告形式。如确需明确该药的敏感度，需重复试验或做稀释法敏感试验。 （4）耐药(resistance)：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。 （5）最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。单位：μg/ml 或 U/ml 。 （6）最低杀菌浓度(minimal bacteriacidle concentration)：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。单位：μg/ml 或 U/ml 。 在临床细菌实验室中，最常用的药敏试验方法是琼脂扩散法，适用于需氧及兼性厌氧菌。对厌氧菌或其他个别菌株的药敏试验，可以采用试管稀释法。
常用药敏试验纸片判断标准与相应的MIC近似值 抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 相应的MIC (μg/ml) 耐药 中介度 中度敏感 敏感 青霉素 10U ≤28 — ≥29 ≥0.2 ≤0.1 链霉素 10μg ≤11 12～14 ≥15 ≤6 氯霉素 30μg ≤12 13～17 ≥18 ≥25 ≤12.5 庆大霉素 13～14 ≥8 ≤4 红霉素 15μg ≤13 14～17 ≤2 四环素 ≤14 15～18 ≥19 ≥16 磺胺药 1.25/23.75μg ≤10 11～15 ≥8/152 ≤2/38 注：MIC为一种药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)
琼脂扩散法 ①将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于琼脂平板上（密集划线法）。 ②用蜡笔在平皿底面将其分为4个区域，分别标记抗生素的名称。 ③用灭菌后的镊子夹取各种抗生素滤纸片，平放至培养基表面的相应位置。 ④置37℃培养24h，测量滤纸片周围的抑菌圈的直径。
青 抑菌圈
3.空气、皮肤、咽部细菌的培养 自然界分布着大量细菌，寄生于人体的正常菌群繁多，在正常情况下不致病。通过本实验认识细菌在皮肤和咽部的分布，并对咽部细菌进行进一步的鉴定。
皮肤细菌的检查： ①取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面分成两半，标明A和B两个区。 ②先将手指在A区按一下，然后再将手指用2％的碘酒和75％乙醇消毒后涂抹B区。 ③将琼脂平板置37℃培养24h，观察结果
咽部细菌的检查： ①用无菌棉拭子蘸取咽部分泌物，涂在血平板一端，用接种划线分离。 ②将血平板置37℃培养24h。观察溶血现象并挑取不同菌落作革兰染色，镜检。
实验材料： 1.大肠杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1管/小组。 2.琼脂平板3个/小组，血平板2个/小组。 3.抗生素小瓶1套/小组。 4.无菌棉拭子2个/小组。
实验报告内容： 1.细菌对抗菌药物的敏感试验（本次实验） 2.皮肤、咽部细菌的培养及咽部细菌的鉴定（下次实验鉴定后写实验报告）