实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌 实验一 微生物学实验常用仪器洗涤及干热灭菌 目的要求 实验原理 实验材料 实验程序 结果与思考题

目 的 要 求 认识微生物实验所需要的各种器皿，了解常用工具和仪器的名称、用途。 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干热灭菌的操作过程。

实验原理 微生物学实验要求较高的无菌状态，因此，实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。 清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。 空的玻璃器皿一般用干热灭菌.

实 验 材 料 玻璃仪器： 洗涤用品： 包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。 Ａ每人数：培养皿 3套； 大试管 3只。 Ｂ每组数：三角瓶 6只； 实 验 材 料 玻璃仪器： Ａ每人数：培养皿 3套； 大试管 3只。 Ｂ每组数：三角瓶 6只； 烧杯（500ml）2只； 烧杯（1000ml）1只； 小试管 6只； 吸管（ 0.2ml 2支， 0.5ml 2支，1ml 2支， 5ml 2支）共8支 Ｃ每橱数：量筒（500ml）1只； 洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。 包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。

实验程序Ⅰ（仪器的认识、清洗与包扎） （一）学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围： （二）学习玻璃器皿的洗涤方法： ①培养皿； ②试管； ③三角瓶； ④烧杯； ⑤吸管； ⑥量筒。 （二）学习玻璃器皿的洗涤方法： （三）学习各种器皿的包扎： 由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径90 mm，高15mm,皿底皿盖均为玻璃制成。 制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。

根据其大小和用途不同，有下列三种型号： (1)大试管(约18mm×180mm) : 可装倒平板用的培养基; 可作制备斜面用（需要大量菌体时用） 装液体培养基用于微生物的振荡培养。 (2)中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用, 用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 (3)小试管[(10～12)mm×100mm]: 一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。

三角瓶: 100mL、250mL、500mL和1000 mL 烧杯: 玻璃吸管: 1mL、2mL、5mL、10mL 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。 烧杯: 50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用来配制培养基与各种溶液等。 玻璃吸管: 1mL、2mL、5mL、10mL

玻璃器皿的洗涤方法: 1、新玻璃器皿的洗涤 在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。 2、旧玻璃器皿的洗涤 洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。 玻璃器皿的洗涤方法: 1、新玻璃器皿的洗涤 在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。 2、旧玻璃器皿的洗涤 （1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗 A 装有固体培养基：刮掉，洗涤 B 带菌的器皿：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时或煮沸0.5小时，然后洗涤 C 带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物 （2）玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗 a 吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。 b 塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗 c 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时然后洗 d 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗 洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上,晾干.

培养皿的包扎： 吸管的包扎： 试管和三角瓶等的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。 2 4～5 cm宽的长纸条. 试管和三角瓶等的包扎：

实验程序Ⅱ（干热灭菌的原理和操作方法 ） 原理 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而 达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有 关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝 固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。 与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃）， 时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则， 包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。

实验程序Ⅱ（干热灭菌的原理和操作方法 ） 操作方法 1．装入待灭菌物品 2．升温 3．恒温 4．降温 5．开箱取物 将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆得 太挤，以免妨碍空气流通；不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 2．升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。 3．恒温 当温度升达到160～170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。 干热火菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 4．降温 切断电源、自然降温。 5．开箱取物 待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。

结果与思考题 1、通过本次实验你认识了微生物学实验常用的哪些器皿？ 2、简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 3、简述干热灭菌的操作步骤。