第一章 红细胞计数、血红蛋白测定（3） 主讲 魏彦刚 检验教研室

教 学 目 标 1、掌握红细胞直接计数方法，原理 2、掌握血红蛋白测定方法选择，测定原理，操作过程 教 学 目 标 1、掌握红细胞直接计数方法，原理 2、掌握血红蛋白测定方法选择，测定原理，操作过程 3、掌握红细胞计数及血红蛋白测定参考值、临床意义

主 要 内 容 1、红细胞计数原理，参考值 2、血红蛋白测定方法选择，测定原理，参考值 3、RBC计数、Hb测定临床意义 4、质量控制

教学重点与难点 重点： 1、红细胞计数、血红蛋白测定参考值、临床意义 2、其检查临床意义 难点： 1、显微镜下特点 2、临床意义

红细胞检查

(red blood cell count ， RBC) [检测原理] 一、红细胞计数-----基本项目 (red blood cell count ， RBC) [检测原理] 1．手工显微镜法: 稀释、计数、换算。

(red blood cell count ， RBC) [检测原理] 一、红细胞计数-----基本项目 (red blood cell count ， RBC) [检测原理] 2．血液分析仪法: 电阻抗法， 流式细胞术激光检测法。

显微镜计数法 1.原理 2. 试剂 a. Hayem稀释液：较传统稀释液 氯化钠---调节渗透浓度， 硫酸钠---调节渗透浓度，防止红细胞聚集，氯化高汞---防腐剂，有毒 缺点：a.如遇高球蛋白血症或自身凝集素增高患者，红细胞易凝集或形成串钱状，影响计数。 b.枸橼酸钠稀释液：应用广泛 c.普通生理盐水:急诊

3.操作 a. 取小试管一支，准确加入红细胞稀释液2.0ml。 b. 毛细血管采血，取血10ul，稀释200倍。 c. 混匀，充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央5个中方格内的红细胞 4.计算 红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×106/L 或 ×1012/L 5个中方格内红细胞数 100

示教 5.报告方式 RBC（/L）= . × 1012/L 6.注意事项 a. 红细胞数量较多，在计数时应按计数原则计数 7.正常参考值 男性 : （4.00-5.50） × 1012/L 女性 : （3.50-5.00） × 1012/L 新生儿:（6.00-7.00） × 1012/L 示教

方法学评价

[质量保证]

参考值 ①成年：男性(4.09～5.74)X1012/L， 女性(3.68～5.13)X1012/L。

(1)年龄与性别的差异： 临床意义 1 ．生理性变化 (2)精神、激素因素： (3)剧烈体力运动和劳动： (4)气压降低： (5)妊娠中、后期：

临床意义 2．病理性变化 (1) 增多： 1)相对性增多：血液浓缩如呕吐、高热、腹泻等 2)绝对性增多： ①继发性增多：组织缺氧：EPO代偿性增高，心肺疾病、 先心、异常Hb等； EPO非代偿性增高：如肾癌、肝癌、子宫肌 瘤、卵巢癌等。 ②原发性增多：如真红、良性家族性红细胞增多症等

临床意义 通过红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容测定就可确定有无贫血。 按病因，可将贫血分成 红细胞生成障碍、 过度破坏 2 ．病理性减少 通过红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容测定就可确定有无贫血。 按病因，可将贫血分成 红细胞生成障碍、 过度破坏 丢失 (失血) 。

临床意义 1)红细胞生成减少： 2 ．病理性减少 骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血 造血物质缺乏或利用障碍 肾性贫血 缺铁性贫血 铁粒幼细胞贫血 巨幼细胞贫血

临床意义 2)红细胞破坏过多： 2 ．病理性减少 ①红细胞内在缺陷： 膜缺陷 遗传性球形 红细胞酶缺陷 G-6-PD缺乏症 膜缺陷 遗传性球形 红细胞酶缺陷 G-6-PD缺乏症 血红蛋白异常 地贫 ②红细胞外在异常： 免疫反应 如新生儿溶血病 机械性损伤 如红细胞破碎综合征 高温烧伤、药物和毒物、疟疾和细菌所致溶贫、 脾功能亢进所致溶血性贫血。

临床意义 3)红细胞丢失(失血)：如急性、慢性失血性贫血。 2 ．病理性减少 药物引起贫血： ①抑制骨髓的药物 如阿司匹林 ①抑制骨髓的药物 如阿司匹林 ②维生素B12、叶酸吸收 如口服避孕药、异烟肼 ③铁吸收障碍药物 如皮质类固醇 ④溶血的药物 如头孢类、氨基甙类抗生素

①高于 6. 8 ×1012 ／ L ， 应采取相应的治疗措施。 ②低于 3.5 ×1012 ／ L 为诊断贫血的界限，应寻找原因。 红细胞计数医学决定水平： ①高于 6. 8 ×1012 ／ L ， 应采取相应的治疗措施。 ②低于 3.5 ×1012 ／ L 为诊断贫血的界限，应寻找原因。 ③低于 1.5×1012 ／ L 应考虑输血。

血红蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 是一种微红色的胶体物质，分子量为 64 458。 二、血红蛋白测定 (hemoglobin concentration determination) 血红蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 是一种微红色的胶体物质，分子量为 64 458。 是一种呼吸载体，每克血红蛋白可携带氧1.34 毫升．成人红细胞总量约有 600 g 血红蛋白，可携氧 800 毫升。

(一)血红蛋白分子结构及成分 FEP Fe++ 血红素 珠蛋白 Hb

(一)血红蛋白分子结构及成分 组成 Hb 的多肽链两大类： ①α类链：αζ和θ链； ②非α链：βδγε链。 α链由 141 个氨基酸组成， β链由 146 个氨基酸组成。

(一)血红蛋白分子结构及成分 每个 Hb 分子由 2 条α类肽链和 2 条β类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素。

(一)血红蛋白分子结构及成分 在正常状态，机体有 99 ％ Hb 的铁原子呈 Fe2+状态，称为还原 Hb ， 1 ％的 Fe3+为高铁血红蛋白， 只有亚铁状态的 Hb 才能与氧结合，此时称氧合血红蛋白

激素的调节 (二)血红蛋白的合成 ①红细胞生成素， ②雄激素。 在人体不同生长时期， Hb 种类与比例不同： 出生后不久β与γ链合成大致等， 出生后 3 个月 HbA （α2β2）＞ 95% ， HbF （α2γ2）≤ 1％。 出生后 HbA2 （α2δ2）占 Hb 总量的 2～ 3 ％。

检测原理 氰化高铁血红蛋白 (HiCN) 测定法 除了硫化血红蛋白外各种血红蛋白 高铁氰化钾氧化 CN-结合 高铁血红蛋白， CN-结合 稳定的棕红色复合物氰化高铁血红蛋白。 540 nm 处有一吸收波峰，用分光光度计测定 换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。

检测原理 氰化高铁血红蛋白 (HiCN) 测定法 反应在18-25℃中进行， 加入非离子表面活性剂可加快红细胞的溶解，减少脂蛋白沉淀产生的溶液浑浊。

方法学评价

方法学评价 常用的比色法 氰化高铁血红蛋白(hemiglobincyanide ， HiCN)测定法 十二烷基硫酸钠 (sodiumdodecylsulfate hemoglobin， SDS-Hb)测定法 碱羟血红蛋白 (alkaline haematindetergent， AHD575)测定法、 叠氮高铁血红蛋白(HiN3)测定法 溴代十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammoniumbromide， CTAB) 测定法等。 国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐HiCN测定法作为Hb测定标准法。

[质量保证] 采血部位 不同的采血部位结果不同，静脉血比毛细血管血的结果低 10 ％～ 15 ％。

①成年： 男性： 131 — 172 g ／ L ； 女性： 113 — 151 g ／ L ； [ 参考值] ①成年：　男性： 131 — 172 g ／ L ； 　 女性： 113 — 151 g ／ L ； ②新生儿： 180 — 190 g ／ L 。 ③婴儿 110 — 120 g ／ L ④儿童 120 — 140 g ／ L ⑤老年 (70 岁以上) ： 男性： 94 — 122 g ／ L ； 女性： 87 — 112 g ／ L 。

[ 临床意义] 临床意义和红细胞计数相似， 但对贫血程度的判断上优于红细胞计数。

需注意： ①在某些病理情况下，血红蛋白和红细 胞的浓度不一定能正确反映全身红细 胞总容量的多少。 ② 在某些贫血，RBC和Hb减少不一致， [ 临床意义] 需注意： ①在某些病理情况下，血红蛋白和红细 胞的浓度不一定能正确反映全身红细 胞总容量的多少。 ② 在某些贫血，RBC和Hb减少不一致， 同时测RBC和Hb ，对诊断更有意义。

①血液总容量改变：大量失血早期 ②全身血浆容量改变： 失水或水潴留 血液浓缩或稀释 影响因素

检测原理及方法学评价 1．显微镜分析法 采用人工显微镜法血涂片染色观察， 是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。 1．显微镜分析法 采用人工显微镜法血涂片染色观察， 是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。 2．计算机图像分析 建立统计模型，以正常红细胞形态 为参比、作出分析， 可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。 3. 血液分析仪法 提供红细胞数量及其他相关参数，对异 常结果报警， 但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。

质量保证 1.有合格的血液细胞形态检验人员 2.选择细胞分布均匀区域进行镜检 3.注意完整规范的检查顺序 低倍镜 细胞分布和染色 低倍镜 细胞分布和染色 油镜 细胞形态,是否存在其他异常细胞 4．减少人为影响因素 全片浏览

复习题 一、名词解释 红细胞计数 红细胞显微镜计数 二、填空： 一、名词解释 红细胞计数 红细胞显微镜计数 二、填空： 原始红细胞经（）、（）、（）、（）各阶段，最终发育为成熟红细胞，入血后红细胞的平均寿命为（）天。 三、是非 1.一般情况下，红细胞计数包括白细胞。 2.网织红细胞属完全成熟红细胞。

小结 我们本节课所讲的内容主要是红细胞的计数和血红蛋白的测定方法，我们不仅要掌握红细胞的发育阶段，还要掌握红细胞计数的原理及正常参考范围。在血红蛋白测定中我们要知道血红蛋白的组成，氢化高铁血红蛋白测定法的原理，还要牢记红细胞和血红蛋白测定的临床意义！

复习题 一、名词解释 贫血 血红蛋白测定 二、填空 1、在正常情况下，血液中血红蛋白主要为（）和（），以及少量的（）和（）。 贫血 血红蛋白测定 二、填空 1、在正常情况下，血液中血红蛋白主要为（）和（），以及少量的（）和（）。 2、氰化高铁血红蛋白测定法，除（）外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白。 三、是非题 1.血红蛋白测定可用于了解贫血的程度，红细胞数量和形态可了解贫血的类型。 四、选择 正常成年男性血红蛋白参考值是 A 110~150g/L B 120~160g/L C 170~200g/L D 120~150g/L