第二章 抗原抗体反应.

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第二章 抗原抗体反应

第一节 抗原抗体反应的原理

抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的物质基础: 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体

抗原抗体反应的原理 抗原抗体结合力 静电引力 (electrostatic forces) 范德华引力:作用最小 (van der Waals interactions) 氢键:最具特异性 (hydrogen bond ) 疏水作用力:作用最大 (hydrophobic interactions) 抗原抗体结合力示意图

抗原抗体反应的亲和性和亲合力 亲和性(affinity) 抗体分子一个抗原结合部位与一个相应抗原表位之间的结合强度 ,取决于二者空间构型互补的程度 抗原抗体的亲和性示意图

抗原抗体反应的亲和性和亲合力 亲合力(avidity) 一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度 抗原抗体的亲合力示意图

抗原抗体反应的原理 亲水胶体转化为疏水胶体 + 抗原 (亲水胶体) 抗体 (亲水胶体) 抗原抗体复合物 (疏水胶体) 电解质 可见反应

第二节 抗原抗体反应的特点

抗原抗体反应的特点 特异性(specificity) 可逆性(reversibility) 比例性(proportionality)

抗原抗体反应的特异性 特异性 特异性:抗原与抗体结合的专一性 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性 抗原抗体反应特异性示意图

交叉反应(cross reactions) 抗原抗体反应的特异性 交叉反应(cross reactions) 两种抗原分子有部分相同或类似结构的抗原表位,可与彼此相应的抗血清发生反应 抗原抗体交叉反应示意图

抗原抗体反应的可逆性 可逆性:抗原抗体为分子表面的非共价结合, 形成的复合物不牢固,一定条件下可解离为 游离抗原和抗体。

抗原抗体反应的可逆性 影响可逆性的因素 ①亲合力:亲合力越高,结合越牢固,越不易解离 ②环境因素:pH、离子强度

抗原抗体反应的比例性 比例性:抗原与抗体发生可见反应遵循一定的量比关系 前带(prezone):抗体过量 后带(postzone):抗原过量 等价带(equivalence zone): 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图

抗原抗体反应的阶段性 第一阶段:特异性结合阶段,反应快,不可见 第二阶段:反应可见阶段,反应慢,出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象

第三节 抗原抗体反应的影响因素

抗原抗体反应的影响因素 ②环境因素 ①反应物自身因素 电解质: 生理盐水或缓冲液 抗原:理化性状、表位种类和数目 酸碱度: pH6~9 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 ②环境因素 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6~9 温 度: 15-40℃,37℃最适

第四节 免疫学检测技术的类型

免疫学检测技术的类型 反应类型 凝集反应(agglutination) 沉淀反应(precipitation) 补体参与的反应 中和反应 标记免疫反应

免疫学检测技术的类型 ① 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀,检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验

免疫学技术的类型② 中和反应 病毒中和试验 检测病毒感染性 毒素中和试验 检测外毒素毒性 标记免疫反应 荧光免疫技术 检测荧光现象 放射免疫技术 检测放射性强度 酶免疫技术 检测酶底物显色 发光免疫技术 检测发光强度 金免疫技术 检测金颗粒沉淀

免疫学检测技术的类型③ 标记免疫技术 用荧光物质、放射性核素、酶或 化学发光物质等标记抗原或抗体, 进行抗原抗体反应后,通过检测 标记物对抗原或抗体进行定性、 定位或定量分析 标记免疫技术 按实际用途分为: ①免疫组织化学技术(immunohistochemistry technique,IHCT) ②免疫测定(immunoassay) 按检测现象分为: ①放射免疫技术 ②荧光免疫技术 ③酶免疫技术 ④化学发光免疫技术 ④金免疫技术 按测定反应体系的物理状态分为: ①均相免疫测定(homogenous immunoassay) ②非均相免疫测定(heterogenous immunoassay)