实验二 免疫血清的制备.

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实验二 免疫血清的制备

实验目的: 熟悉免疫血清制备的基本过程 了解动物实验的基本知识

实验原理: 抗原 免疫动物 产生特异性抗体 分离血清(免疫血清、多克隆抗体) 抗原 免疫动物 产生特异性抗体 分离血清(免疫血清、多克隆抗体) 决定抗体质量的相关因素: 抗原纯度、免疫原性、动物应答能力、免疫程序 适当途径、预定方案 一定时间 本实验用绵羊红细胞(SRBC)作为抗原,免疫家兔,制备兔抗羊红细胞免疫血清(溶血素)。

实验材料: 动物 健康成年雄性家兔(2-3kg) 健康成年绵羊 试剂 20%SRBC悬液、生理盐水、碘酒、 75%酒精 器材 剪刀、镊子、无菌注射器、针头、量筒、 无菌毛细滴管、离心管、三角烧瓶、 动物固定架、手术器械一套、塑料放血管

实验方法: 1、分组 全班分为9组(每组4人一组) 每组一只兔子

2、抗原制备(已准备) 碘酒和75%酒精消毒绵羊皮肤并抽取颈静脉血液,注入含有等量阿氏液(玻璃珠)的三角烧瓶内,摇晃混匀。分装后置4℃冰箱内,可使用3周。(已准备) 无菌取上述绵羊血于离心管中,用无菌生理盐水洗涤SRBC3次(2000r/min,离心5min,最后一次离心10min,弃上清) 根据红细胞压积,用生理盐水配成20%SRBC悬液。

3、免疫动物 测定凝集素 选择健康雄性家兔2-3只 耳静脉采血1ml 分离血清 与羊红细胞做凝集实验,测定有无凝集素 (无或仅有微量时,该兔子可用于免疫)

免疫动物-用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子 试血 末次注射后第七天(第22天),耳静脉采血1ml,用试管凝集试验滴定溶血素效价(1:2000以上可用)。 免疫日期 第1天 第3天 第5天 第7天 第12天 第15天 注射途径 皮内 耳静脉 免疫原 全血 20%悬液 剂量 (ml) 0.5 1.0 2.0

采血并分离血清 心脏采血法收集被免疫兔子的血液于三角烧瓶中 待其凝固、贴壁 4℃冰箱过夜 吸取上层血清 3000r/min,离心10min 收集上层血清待鉴定、纯化, 小量分装,-20℃冻存

思考: 该实验中应注意哪些事项?