醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 山西大学生科院生化教研室.

Slides:



Advertisements
Similar presentations
第二节 各种标本采集技术 一、痰标本采集技术 二、咽拭子标本采集技术 三、呕吐物标本采集技术 四、血标本采集技术 五、尿标本采集技术 六、粪便标本采集技术.
Advertisements

第九章 各种标本采集法. 学习目标  1 、概述标本采集的原则  2 、说出各种标本采集的方法及注意事项  3 、能正确完成各种标本的采集.
中医护理 —— 鱼腥草 护理 1334 班 小组成员:郭丽丹 43 杨专 39 张建 35 李晓敏 27 陈燕红 25 张良州 8 分工合作: 收集整理 43 郭丽丹 35 张建 27 李晓敏 讲解 39 杨专 25 陈燕红 8 张良洲.
护理基本技术 第十二单元 冷热疗技术 雅安职业技术学院护理系 Tel :
玉田三中 化学组. 生活中的这些物质 …… 酸的 食醋、酸奶和某些水果都是 酸的,你是如何知道的?
第三节 排气护理. 一、肠胀气病人的护理 肠胀气是指胃肠道内有过多的气体积聚,不能 排出。 1. 心理护理 2. 适当活动 3. 必要时遵医嘱给药或行肛管排气 4. 健康教育.
第四章 基础护理操作技术 中 国 医 科 大 学朱 闻 溪中 国 医 科 大 学朱 闻 溪 中 国 医 科 大 学朱 闻 溪中 国 医 科 大 学朱 闻 溪.
任务三 穿刺术. 兽医基础 穿 刺 术穿 刺 术 一、胸膜穿刺术胸膜穿刺术 二、腹腔穿刺术腹腔穿刺术 三、瘤胃穿刺术瘤胃穿刺术 四、瓣胃穿刺术瓣胃穿刺术 五、肠管穿刺术肠管穿刺术 六、膀胱穿刺术膀胱穿刺术.
实验一 血清蛋白质 醋酸纤维素薄膜电泳. 一、实验目的 1. 了解电泳的基本原理; 2. 掌握电泳分离蛋白质的原理; 3. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
中国. 中学政治教学网崇尚互联共享 自然医学生机健康法 食疗.
客家娘酒 生命科学院 062 第二组 组长:李宗权 组员:林立强 李嘉豪 郑灿明 李耀斌 程惠源.
实验专题模块三 血液生化检验  血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳  血清尿素氮的测定.  血液是在心脏和血管腔内循环流动的一种组织。成人的血液 约占体重的十三分之一,相对密度为 ~ , pH 值为 7.3 ~ 7.4 ,渗透压为 313 mmol/L 。  血液由血浆和血细胞组成。血浆内含血浆蛋白(白蛋白、球.
第二节 排便护理. (一)正常粪便的观察 1. 量与次数 排便是人体基本生理需要,每日排便量与食 物 的种类、数量及消化器官的功能有关。一般成人每日排便 1 ~ 2 次(婴幼儿 3 ~ 5 次),平均量 100 ~ 300g 。 2. 形状与颜色 正常粪便柔软成形,呈黄褐色,婴儿的粪 便呈黄色或金黄色。粪便的颜色也因摄入的食物和药物.
肝脏谷丙转氨酶活力测定. 一、实验目的 掌握谷丙转氨酶的测定方法。 二、实验原理 谷丙转氨酶作用于丙氨酸及 α- 酮戊二酸,生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与 2.4- 二硝基苯肼作用,生成二硝基苯腙,此 物在碱性溶液呈红棕色,与经同样处理的标准丙酮酸比色, 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
芦荟汁酶解液 乳酸菌发酵饮料的研制 上海市奉贤区育秀实验学校 陈力. 2 设想的由来 3 问题的出现 由于芦荟含有较多的凝胶大分 子物质,加热、调酸等会影响 胶体稳定性,出现变色和沉淀 等现象。
第 3 节 雾化吸入疗法.
常见鱼病的诊断与防治 主讲:黄志秋.
药物溶媒 生理盐水还是葡萄糖?.
东北师范大学生物基础实验教学中心 生物化学实验——电泳技术 张丽萍 魏春雁.
第一章 尿液检查.
第一节 排尿护理.
实验四 植物细胞微丝束的观察 一、实验目的 掌握考马斯亮蓝R250染植物细胞内微丝束的方法。.
项目二十 生态养猪技术 梁春凤
胸部 主要骨骼标志 胸骨上切迹 胸骨柄 胸骨角 肋骨 肋间隙 剑突 肩胛骨 肋脊角. 胸部 主要骨骼标志 胸骨上切迹 胸骨柄 胸骨角 肋骨 肋间隙 剑突 肩胛骨 肋脊角.
体 体 育 育 保 保 健 健 学 学 实 实 验 验 主讲人:王会凤 黄淮学院体育系.
留置囊性尿管操作中常见 护理问题及对策.
中医美容保健.
第7章 隔离技术 厦门医学高等专科学校 基础护理教研室.
生活护理技术 项目一 医院感染的预防与控制 项目二 排泄护理技术 项目三 促进呼吸功能护理 项目一 冷热疗法 项目二 标本采集 项目三
醋酸纤维薄膜电泳 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳分离血红蛋白和细胞色素C
膳食调查与评价 1.
学习情境三 分娩护理 任务二 异常分娩妇女的护理 子任务1 产力异常.
血清总胆红素和结合胆红素的测定 董雷鸣.
实验二十七 磷、胆红素测定.
分娩期产妇的护理.
5.4.脂类的测定 概述 脂类的测定方法 索氏提取法 酸水解法 罗紫-哥特里法
实验一 小鼠骨髓细胞染色体的制备和观察 河北大学 基础医学实验教学中心 医学遗传学实验.
实验七 霉菌个体、群体形态观察.
产后出血产妇的护理.
教学目标: ★ 掌握小儿急性充血性心力衰竭的临床表现、急救护理; ★ 熟悉其常见原因和健康指导。.
尿石症病人的护理 目的与要求 熟悉尿石症的病因 理解尿石症病人的临床表现与治疗 掌握尿石症病人的护理,预防结石复发的措施。
生物科專題研習 甚麼環境因素會影響麵包發霉的速度? 組員名單﹕3E 潘蘭平、潘淑儀.
鸡病防治技术 涞源职教中心.
第五节 洗胃术.
菜豆.
第一节 鸡腿菇栽培技术 主讲 刘柱明.
粪 便 检 查 主讲老师:沈萍.
第十八章 药物疗法与过敏试验法 郭三花 岳月梅 忻州职院护理系.
导尿术.
盆腔炎的护理 梅剑娟.
实验七 蛋白质免疫印迹实验 (Western Blotting).
第三节 电泳技术 Electrophoresis
醋酸纤维薄膜电泳法分离 蛋白质.
SDS-PAGE鉴定菠萝蛋白酶的纯度.
周围静脉输液、输血 南通大学护理学院基础护理教研室.
促胃肠动力药物筛选 —离体组织、器官水平药物筛选
培养基、试剂的配制及 细菌纯化培养.
氨基酸等电点的计算和应用 郑芳芳.
Hands-On.
第8章 静电场 图为1930年E.O.劳伦斯制成的世界上第一台回旋加速器.
医学细胞生物学实验 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察 徐志浩 遗传与基因工程教研室 院系楼西侧一楼 2016年.
实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应 等电点测定
四、标准加入法 (Q=0) 序 号 测定液浓度 c c c 测定液体积 V V V 标液浓度 cS cS cS
第五节 缓冲溶液pH值的计算 两种物质的性质 浓度 pH值 共轭酸碱对间的质子传递平衡 可用通式表示如下: HB+H2O ⇌ H3O++B-
Hands-On.
臺中高級工業學校107學年 【學號電繡】說明.
过氧化氢含量的测定.
K2Cr2O7标准溶液 的配置 主讲人:李雪莲
床上洗头.
柑橘皮中黄酮两种提取方法的探索 及含黄酮类饮料生产工艺改进
Presentation transcript:

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 山西大学生科院生化教研室

一、实验目的 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理 二、实验原理 电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离 影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象 影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状

实验原理 采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 μm,有很强的通透性,对分子移动阻力很小 本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同,在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳,染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快,其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白

三、实验器材 1.DYY-Ⅲ2型常压电泳仪:北京市六一仪器厂生产,1套/2组。

操作指南:电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成,,两者之间有专门的连线连接。电泳槽有两个互相隔离的槽,各自装有缓冲液,接不同的电极,红色为正极,黑色为负极。每个槽上都有一根可移动的横杆,滤纸或纱布的一头搭在横杆上,另一头浸入缓冲液中,形成了滤纸桥。两杆之间的距离调节到略小于醋酸纤维薄膜的长度,点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上,。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电源连接好后,将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上,盖上盖子,通电,调整好电压,进行电泳。注意电泳槽的电极方向,负极应与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前,该电泳仪已改进为数显式的DYY-6C型。

2.醋酸纤维薄膜(2 cm×8cm):2片/人。 3.培养皿:一排桌子(即4组)公用5套,包括平衡、染色各用一套,漂洗用3套。 4.点样器:一个/组。 5.滤纸:公用。 6.玻璃板:一块/组。 7.镊子:一个/组。 8.玻棒:公用。

四、实验试剂 1.巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度0.07):巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,用蒸馏水定容至1000mL。 2.染色液:氨基黑10B 0.25g,用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解(可重复使用)。 3.漂洗液:甲醇或乙醇45mL,冰醋酸5mL,水50mL,混匀。 4.透明液(仅在定量分析时使用):无水乙醇7份,冰醋酸3份,混匀。

五、实验操作 浸泡:将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线,将之置于盛有缓冲液的平皿中,浸泡30 min方可用于点样 点样:用镊子取出浸透的薄膜,夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液,然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上)。在另一 载玻片上滴一滴血清,点样器(用盖玻片的一边)在血清上蘸一下(可来回移动一次),再将点样器轻印在加样线上,使血清渗透到薄膜内,形成均匀的直线

电泳槽的准备:根据电泳槽膜支架的宽度,裁剪尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中,各倒入等体积的电泳缓冲液,在电泳槽的两个膜支架,各放两层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电泳缓冲液中。当滤纸全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上,即为滤纸桥

电泳:将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(点样面朝下),另一端平贴在阳极端支架上。盖上电泳槽盖,使薄膜平衡10 min。通电,调节电压至160 V,电流强度为0.4~0.6 mA/cm膜宽度,电泳时间约25 min 染色:电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5 min 漂洗:将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次,直至背景蓝色脱尽,条带清晰为止,可得到色带清晰的电泳图谱

卧式水平电泳槽

六、注意事项 市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。若飘浮于液面的薄膜在15~30 s内迅速润湿,整条薄膜色泽深浅一致,则此膜均匀可用于电泳 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液,其浓度为0.05~0.09 mol/L。选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓冲液浓度过低,则区带泳动速度快区带扩散变宽;缓冲液浓度过高,则区带泳动速度慢,区带分布过于集中,不易分辨 点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免引起样品扩散。但不宜太干,否则样品不易进入膜内,造成点样起始点参差不起,影响分离效果 点样时,动作要轻、稳,用力不能太大,以免损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带分离效果 电泳时应选择合适的电流强度,一般电流强度为0.4~0.6mA/cm膜宽度。电流强度高,则热效应高;电流过低,则样品泳动速度慢且易扩散 操作过程为防止指纹污染,应戴手套

七、实验思考 用醋酸纤维薄膜电泳做电泳支持物有什么优点? 电泳图谱清晰的关键是什么?如何正确操作?