使用 Api 產品的目的 鑑定 樣品 培養基分離 鑑定

(compare with selective medium & morphology) 病原菌的分類 革蘭氏染色 未知菌 (compare with selective medium & morphology) 革蘭氏陽性菌 革蘭氏陰性菌 葡萄糖非發酵性菌 腸內菌 其他 球菌 Catalase 桿菌 陽性 陰性 E.coli Salmonella spp Shigella spp Neisseria spp Haemophilus spp Campylobacter spp L. monocytogenes Bacillus cereus Corynebacteria Lactobacillus S. aureus Streptococcus 其它選擇 酵母菌 厭氧菌 P. aeruginosa Acinetobacter spp Clostridium botulinum Candida

(compare with selective medium & morphology) Api 產品的分類 葡萄糖非發酵性菌 腸內菌 其他 革蘭氏染色 未知菌 (compare with selective medium & morphology) 革蘭氏陽性菌 革蘭氏陰性菌 球菌 Catalase 桿菌 陽性 陰性 其它選擇 酵母菌 厭氧菌 API 10S API 20E API NH API CAMPY API 20NE ATB ID 32E ATB ID 32GN API 20 STREP API STAPH API Listeria API Coryne API 50 CHB API 50 CHL ID 32 STAPH Rapid ID 32 STREP API 20 A API 20 C AUX ATB 32 C Rapid ID 32 A

葡萄糖非發酵性菌 腸內菌 其他 革蘭氏陰性菌 API 10S API 20E API 20NE

Procedure before using API Pure culture has been obtained from a well-isolated colony. Thus, biochemical reaction can be verified. Basic information has been obtained such as Gram positive or negative, enteric bacteria or not…etc.

試劑組成 ● 無菌礦物油 ● 生理食鹽水 ● 反應試藥 ● 培養盒 ● 滴管 ● API 20E 試劑條 TDA、VP1、VP2、James ● 無菌礦物油 ● 生理食鹽水 ● 反應試藥 TDA、VP1、VP2、James ● 培養盒 ● 滴管 PSI PIPETTE ● API 20E 試劑條

Procedure 24 挑取純菌落 (pure culture) 配置細菌懸浮液加入生理食鹽水或無菌水 選取適當的試劑條,將細菌 INCUBATOR 24 C 37 挑取純菌落 (pure culture) Procedure 配置細菌懸浮液加入生理食鹽水或無菌水 選取適當的試劑條,將細菌 懸浮液加入每一個反應孔內 培養時間 培養溫度 加入指定的顯色劑(Reagent) 判讀 電腦軟體 (API Lab Plus, ATB Plus)

實驗流程 (1) 挑取單一菌落 配製菌株懸浮液 打開瓶口方式

實驗流程 (2) ● 培養盒加入適量水 ● 置入試劑條 ● 菌液分注於各反應槽

API 20E cupule tube 試劑條中的每一個反應槽分為兩個部份 前端為 tube, 圓孔為 cupule 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 API 20 E 2 4 1 2 4 1 2 4 ONPG ADH LDC ODC H2S CIT URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX cupule 試劑條中的每一個反應槽分為兩個部份 前端為 tube, 圓孔為 cupule tube ONPG TDA IND GLU 英文字母下未做任何記號者, 細菌懸浮液加至 tube 部份 MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA LDC 英文字母下劃橫線者, cupule 的部份加入無菌礦物油 ADH ODC H2S URE 英文字母下加框者, 細菌懸浮液加滿至 cupule 部份 CIT VP GEL 24

實驗流程 (3) ● 加入無菌礦物油 ● 菌液分注於各反應槽 ● 蓋上培養盒蓋 ● 37℃ 24小時培養

實驗流程 (4) ● 自培養箱取出試劑條 ● 反應試劑滴入適當的反應槽 TDA、JAMES、VP1 、VP2

API 20E 添加劑 TDA 添加TDA試劑一滴後立即觀察 IND 添加JAMES試劑一滴後立即觀察 [VP] 添加VP1 與VP2試劑各一滴後等10分鐘後觀察

負 (-) 正 (+) ONPG 無色 黃 ADH 紅/橙 LDC ODC CIT 淡綠/黃 綠藍/藍 H2S 黑 URE TDA 棕/深咖啡色 IND 粉紅-紅 VP GEL 黑色顆粒未散開 黑色顆粒散開

負 (-) 正 (+) GLU 藍 黃 MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX 無色 紫

+TDA +James +VP1VP2 +NIT1,2+Zn

計分方式 三個反應為一組, 每一組的第一個反應為正, 計分 1 每一組的第二個反應為正, 計分 2 每一組的第三個反應為正, 計分 4 API 20 E 2 4 1 2 4 1 2 4 ONPG ADH LDC ODC H2S CIT URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX 三個反應為一組, 每一組的第一個反應為正, 計分 1 每一組的第二個反應為正, 計分 2 每一組的第三個反應為正, 計分 4 三反應加總分數為該組總分 查菌方式 利用上組計分方式得到一串數字, 利用此數字串鍵入電腦軟體

計分方式 5 1 4 4 5 5 2 ＋ － ＋ ＋ － － － － ＋ － － ＋ ＋ － ＋ ＋ － ＋ － ＋ － API 20 E ONPG ADH LDC ODC H2S URE TDA IND GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX CIT VP GEL ＋ － ＋ ＋ － － － － ＋ － － ＋ ＋ － ＋ ＋ － ＋ － ＋ － 5 1 4 4 5 5 2

軟體查詢 (1) ● 選擇試劑條選項

軟體查詢 (2) ● 輸入反應或密碼

軟體查詢 (3) ● 報告評語 ● ID%: 鑑定結果 ● 不符合之典型反應數 ● T value: 典型值 ● 鑑定結果

軟體查詢 (4) ● 不符合之典型反應

軟體查詢 (5) -- Decoded Profile

軟體查詢 (6) – Complementary test ● 輔助試驗 Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology

http://210.242.211.31/servlet/Identify?action=prepareNew&stripId=1

試驗條      API 20 E V4.1   生化編號      3 3 0 5 7 7 3   注      可能为阴沟肠杆菌   有意 義的分類单位     鑑 定%  T 值(T指数)  不 一致的试验   Enterobacter cloacae  59.4      0.86 INO    12%    Enterobacter sakazakii   40.4      0.82  SOR  8% 

  下 一个分类单位  鉴 定% T 值(T指数) 不 一致的试验   Enterobacter aerogenes 0.1      0.22 ADH LDC   0% 99%    補充實驗     黄 色素     七 叶灵(水解)     Enterobacter cloacae     0%     30%   Enterobacter sakazakii     98%     100%

Api 的結果 ID% 鑑定百分比 = 機會率 表示同一資料庫與不同菌類的比較 T Index = 真實值 表示同一菌株各項生化反應的典型程度 Api 的結果

(James試劑/立即或IND吲哚/2分鐘) 試驗 底物 反應/酶 結   果 陰性 陽性 ONPG 鄰硝基苯-半乳糖苷 b-半乳糖苷酶 無色 黃（1） ADH 精氨酸 精氨酸雙水介酶 黃色 紅/橙色(2) LDC 賴氨酸 賴氨酸脫羧酶 橙色 ODC 鳥氨酸 鳥氨酶脫羧 CIT 檸檬酸鈉 檸檬酸利用 淡綠/黃 蘭綠/蘭(3) H2S 硫代硫酸鈉 H2S產生 無色/微灰 黑色沉澱/細線 URE 脲素 脲酶 紅/橙色 TDA 色氨酸 色氨酸脫氨酶 (TDA/立即) 深褐 IND 吲哚產生 (James試劑/立即或IND吲哚/2分鐘) James 粉紅   紅色環

VP 丙酮酸鹽 3-羥基丁酮產生 乙醯甲基甲醇 (VP 1 + 2 / 10分鐘) 無色 粉紅/紅色 GEL Kohn明膠 明膠酶 黑色素不擴散 黑色素擴散 GLU 葡萄糖 發酵/氧化(4) 藍/藍綠 黃色 MAN 甘露醇  發酵/氧化(4)  藍/藍綠  黃色 INO 肌醇 SOR 山梨醇 RHA 鼠李糖 SAC 蔗糖 MEL 密二糖 AMY 苦杏仁苷 ARA 阿拉伯糖 OX 在濾紙上 細胞色素氧化酶 (OX / 1 - 2分鐘) 紅色

結果判定: API鑑定結果是以判讀的計分與菌種資料庫作比較, 鑑定結果以兩個主要數值表示: 鑑定百分比 (ID%; 範圍是0 ~ 99.9%) ---"所分離的菌株是否屬於試劑條內菌種資料庫的菌株符合的程度" 鑑定百分比值越高, 結果越吻合 典型指數 (T index; 範圍是0 ~ 1) ---"所選的細菌是否確實與其菌株相一致,或者相異於最典型的菌株" T值越接近1, 所分離的細菌越典型

依照鑑定百分比與T值的綜合來決定鑑定的結果並提供鑑定結果一個確切評等,大致如下: EXCELLENT IDENTIFICATION (非常好): % id > 99.9 and T > 0.75 VERY GOOD IDENTIFICATION (很好): % id > 99.0 and T > 0.5 GOOD IDENTIFICATION (好): % id > 90.0 and T > 0.25 ACCEPTABLE IDENTIFICATION (可接受): % id > 80.0 and T > 0

To the species level (鑑定至菌種層): 報告結果為2至4個菌株且屬於同一菌種 To the genus level (鑑定至菌屬層): 報告結果為2至4個菌株且屬於同一菌屬

若鑑定結果確實度不夠高而無法給予前述的評等,則會出現其他的鑑定評等 LOW DISCRIMINATION (低辨識度): 報告結果為數個相似的菌株,需進行加作試驗。 NOT RELIABLE (不可靠): 鑑定百分比總和低於80。需確認菌株是否為純培養或檢查試劑選擇及使用是否正確。 DOUBTFUL PROFILE (可疑的結果): 不典型的鑑定結果,即數個反應與典型菌株不符。可能屬於少見的生化型(biotype)。可利用其他資料確認結果,如型態學,菌種來源,加作試驗等。另所挑取的菌落亦可能受到污染(mix culture)。 UNACCEPTABLE PROFILE (不能接受的結果): 鑑定結果與菌種資料庫中的菌株都不相符。需確認菌株是否為純培養或檢查試劑選擇及使用是否正確。

API 20E 添加劑 TDA 添加TDA試劑一滴後立即觀察 IND 添加JAMES試劑一滴後立即觀察 [VP] 添加VP1 與VP2試劑各一滴後等10分鐘後觀察

負 (-) 正 (+) ONPG 無色 黃 ADH 紅/橙 LDC ODC CIT 淡綠/黃 綠藍/藍 H2S 黑 URE TDA 棕/深咖啡色 IND 粉紅-紅 VP GEL 黑色顆粒未散開 黑色顆粒散開

負 (-) 正 (+) GLU 藍 黃 MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX 無色 紫