生物化学实验讲义
主编 龚美珍 刘士平
三峡大学化学与生命科学学院
目 录
生物化学实验须知 1．实验室规则 2．实验记录 3．实验报告的书写 4．生物化学实验课评分标准
实验室一些常用知识介绍 一．玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 二．生物化学常用缓冲液 三．pH 值的测定 1. 玻璃仪器的洗涤 2. 一些常用的洗涤剂 二．生物化学常用缓冲液 1. 磷酸盐缓冲液 2.Tris缓冲液( 三羟甲基氨基甲烷) 3. 硼酸盐缓冲液 4. 氨基酸缓冲液 三．pH 值的测定
实验一 糖的颜色反应
一、实验目的
、了解糖类的某些颜色反应的原理
、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法
二、实验原理
、莫氏（Molisch）试验
糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生产糠醛或糠醛衍生物，后者能与a-萘酚生成紫红色缩合物。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
、塞氏（Seliwanoff）试验
在浓酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或加热时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
、杜氏（Tollen）试验
三、实验器材
四、试剂
、莫氏（Molisch）试剂：5%a-萘酚的酒精溶液，称取a-萘酚5g，溶于95%酒精中，定容至100ml,贮藏于棕色瓶中。此试剂需新鲜配制
、塞氏（Seliwanoff）试剂：称取0.05g间苯二酚溶于30ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100ml,此试剂需新鲜配制。
、杜氏（Tollen）试剂：2%间苯三酚乙醇（95%）溶液3ml，缓慢加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml即得，此试剂需新鲜配制。
、材料：1%葡萄糖溶液，1%果糖溶液，1%蔗糖溶液，1%淀粉溶液，1%阿拉伯糖溶液，1%半乳糖溶液,0 、材料：1%葡萄糖溶液，1%果糖溶液，1%蔗糖溶液，1%淀粉溶液，1%阿拉伯糖溶液，1%半乳糖溶液,0.1%糠醛溶液，浓硫酸500ml，浓盐酸500ml
1、莫氏（Molisch）试验：于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、
2、塞氏（Seliwanoff）试验：于3支试管中，分别加入0. 5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，各加入塞氏试剂2 2、塞氏（Seliwanoff）试验：于3支试管中，分别加入0.5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，各加入塞氏试剂2.5ml，摇匀，置沸水浴中，比较各管颜色变化及红色出现的先后次序。
、杜氏（Tollen）试验：于3支试管中各加入杜氏试剂1ml，再于3支试管中分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，观察颜色变化，并记录颜色变化的时间。
实验二 糖的化学性质
一、实验目的
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基（苷羟基）无还原性。但在酸的作用下，淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖，使之具有还原性。淀粉溶液遇碘呈蓝色。
班乃德（Benedict）试剂为含Cu2+ 的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色的Cu2O。
三、实验器材
1、试管及试管架 2、滴管 3、水浴锅
四、试剂
1、Benedict试剂：称取85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶于400ml水中。另称取8 1、Benedict试剂：称取85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶于400ml水中。另称取8.5g硫酸铜溶于50ml热水中。将硫酸铜溶液缓慢加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。
2、2%葡萄糖溶液、2%蔗糖溶液、2%麦芽糖溶液、1%淀粉溶液
3、2%硫酸、10%NaOH溶液、0.1%碘液
五、操作
实验三：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）
实验四：还原糖和总糖的测定（费林试剂法）
实验五：果胶的提取和果酱的制备
实验六：卵磷脂的提取、鉴定和应用
实验七：油脂碘价的测定（韦氏法）
实验八：油脂过氧化值的测定
实验九：油脂酸价的测定
实验十：蛋白质的变性、凝固及
沉淀反应
实验十一：蛋白质的颜色反应
实验十二：氨基酸总量(氨态氮)的测定