Protein蛋白質3-Polyacrylamide gel 製備

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Protein蛋白質3-Polyacrylamide gel 製備

實驗原理: SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)為變性(denature)的蛋白質電泳,可依分子量分離出不同大小的蛋白質成分。 實驗材料: Acrylamide + bis-acrylamide ( 37.5 : 1 )、APS (ammonium persulfate)、TEMED、Running buffer及Sample buffer。 儀器:SDS-PAGE製膠器。

實驗方法: a. 下層製膠(Running gel)-組合置膠器後,於下層膠體溶液中迅速加入APS及TEMED混合均勻,注入玻璃板間空隙達孔梳下1 cm左右,再注入少量去離子水隔離空氣,靜置凝膠約30 min。 b. 上層製膠(Stacking gel)-將下層膠上方的水分倒掉,同樣於上層膠體溶液中迅速加入APS及TEMED混合均勻,注入玻璃板間至上緣,並插入孔梳,靜製凝膠約30 min。

Running gel : ddH2O 4.9 ml Acrylamide /bis( 37.5 : 1 ) 2.5 ml Tris-HCl (pH 8.8) 2.5 ml SDS (10%) 0.1 ml APS (10%) 50 μl TEMED 5 μl

Stacking gel : ddH2O 3.2 ml Acrylamide /bis( 37.5 : 1 ) 0.5 ml Tris-HCl (pH 6.8) 1.25 ml SDS (10%) 0.05 ml APS (10%) 25 μl TEMED 5 μl