实验八 石蜡切片法
一 、实验目的 学习石蜡切片法 了解组织染色原理
二、实验原理 用石蜡渗透固化组织; 用碱性染料如苏木精、碱性品红等,使细胞核着色; 用酸性染料如伊红、酸性品红等,使细胞中的嗜酸性成分着色,如蛋白质。
三 、实验用品 1、器材: 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、镊子、烘箱、离心管或青霉素瓶子。 2、试剂 苏木色精、伊红、二甲苯、中性树胶、酒精、石蜡、氨水、盐酸、蛋清、甘油。 3、材料 各类你感兴趣的固定标本。
四、实验步骤 1、取材 2、固定 3、漂洗 4、脱水 5、透明 6、透蜡 7、包埋 8、修块 9、切片 10、染色
取材到切片 取材——固定(Cannoy’s),材料厚度2mm。 100%酒精——100%酒精——二甲苯:酒精(1:1)——二甲苯——二甲苯——二甲苯:石蜡(65℃ 1:1)——石蜡(65℃)——石蜡(65℃),以上处理各10-30min,视材料大小而定,最后一步石蜡20min 。 包埋——修块——切片——贴片
脱蜡与复水 二甲苯——二甲苯——二甲苯/无水乙醇(1/1)——无水乙醇 ——无水乙醇——95%乙醇——80%乙醇——70%乙醇——50%乙醇——蒸馏水。 以上处理各2-3min。
染色与观察 1%苏木色精(5min)——水洗——0.5%盐酸分色(数秒)——水洗——0.4%氨水蓝化——水洗( 5min )——70%酒精——80%酒精——1%伊红(95%酒精溶解)——95%酒精——95%酒精——100%酒精——100%酒精——酒精/二甲苯——二甲苯——二甲苯——中性树胶封片。 未注明时间的一律处理2-3min。
五、作业 简述石蜡切片过程,绘制你所观察到的细胞形态。 提交一张你认为制作较好的玻片。