实验六: 肌苷的分析
肌苷 9b-D-核糖次黄嘌呤 肌苷在体内参与细胞能量代谢和蛋白质合成,提高相关代谢酶的活性,改善肝脏功能,促进受损肝脏的恢复。肌苷片用于急、慢性肝炎的辅助治疗,规格:0.2g。
一、鉴定 1、取本品2片,研细,加水10ml溶解,滤过,取滤液1ml,等体积 3,5-二羟基甲苯溶液(含盐酸,Fe3+),混匀 ,在水浴中加热约10min,即显绿色----鉴别核糖 2、取本品饱和水溶液2mL(可直接取鉴别1中的滤液),加氨制硝酸银试液数滴,即产生白色胶状沉淀----鉴别嘌呤碱基
3、将本品配成10mg/mL的溶液,在200-400nm波长内扫描,在248nm±1nm处有最大吸收,在222nm±1nm处有最小吸收。 溶液配制:取10片肌苷片,精密称定,计算平均每片质量,研细,精密称取适量(相当于肌苷0.1g),置于100ml容量瓶,加水充分振摇溶解,用水稀释至刻度,滤过。精密量取续滤液1.0mL , 置100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,制成每ml约含10mg的溶液。 波长(nm) 200 210 215 220 222 225 230 240 245 吸光度 248 250 255 260 270 300 330 360 400
二、次黄嘌呤的检查 + 精密称取本品0.5g,置50mL量瓶,加水溶解并稀释至刻度,摇匀过滤,取续滤液(已配制), 吸取上述溶液1mL(毛细管高度约3mm即可),以次黄嘌呤的饱和水溶液为对照品,分别点于3cm ×20cm层析滤纸上,以水为展开剂,上行展开至6~7cm处,取出晾干,于紫外灯254nm下检视,不得出现杂质斑点。 肌苷 次黄嘌呤
三、含量测定(紫外分光光度法) 吸收系数法: 取鉴定3中的溶液,测定248nm±1nm附近的最大吸光度,已知肌苷的百分吸收系数 为460,根据朗伯比尔定律。计算肌苷片的含量,并与标示量比较。
四、操作要点 1.纸色谱检查中,起始样点面积尽可能小,否则展开后斑点扩散 严重,影响观察; 2.氨制硝酸银实验观察到现象后立即清洗试管; 3. 本实验用吸光系数法测定含量,其优点是操作简便、快捷, 不必用对照品。但该法受仪器精度、操作及环境因素等影响较 大,因此测定前必须对紫外-可见分光光度计进行校正与检定, 波长、吸光度的准确度、杂散光均应符合要求,才能保证结果 的准确。
附录:2010版药典中肌苷的分析方法