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实验二十七 磷、胆红素测定
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一、实验原理： P：磷在酸性条件，钼酸铵与蛋白反应形成非还原性磷钼酸化合物，在340nm测量吸光度，吸光度增加与血清无机磷成正比，与同样处理的标准品比较，可求得样本中无机磷的含量。
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总胆红素（T.Bili)： 对氨基苯磺酸＋HCL+NaNO2 氯化重氮苯磺酸＋NaCL TBIL+氯化重氮苯磺酸 催速剂 偶氮胆红素 直接胆红素（D.Bili) ： DBIL+氯化重氮苯磺酸 偶氮胆红素
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二、实验试剂： P: R1：钼酸胺、硫酸 R2：吐温-80 磷标准液：1.29mmol/L 取13mlR1与0.5mlR2混合均匀，为工作液
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总胆红素： R1：对氨基苯磺酸、盐酸 R2：亚硝酸钠 总胆红素标准液：36μmol/L R1：R2＝5：1 即为工作液 标准液用2ml蒸馏水复溶后可直接使用
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直接胆红素： R1：EDTA、盐酸、对氨基苯磺酸 R2：亚硝酸钠 直接胆红素标准液：21.8μmol/L R1：R2＝40：1 即为工作液 标准液用2ml蒸馏水复溶后可直接使用
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三、实验操作： P: 空白 标准 测定 蒸馏水 25μl 标准液 25μl 血清 25μl 试剂 1ml 1ml 1ml 混匀37℃，水浴10min、半自动生化分析仪12。
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T.Bili： 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2ml 工作液 2ml 2ml 2ml
试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R ml ml ml 工作液 ml ml ml 生理盐水 0.1ml ml 标准液 ml ml 样品 ml ml 混匀20－25℃， 10min、546nm比色
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D.Bili： 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2m 工作液 2ml 2ml 2ml
试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R ml ml m 工作液 ml ml ml 生理盐水 ml ml 标准液 ml ml 样品 ml 0.08ml 混匀37℃， 5min、546nm比色
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四、计算： 磷浓度=A样品/A标准×C标准 胆红素浓度=[（A样品-A样品空白）- （A试剂-A试剂空白）]×F F=C标准/[（A标准-A标准空白）- （A试剂-A试剂空白）]
![四、计算： 磷浓度=A样品/A标准×C标准 胆红素浓度=[（A样品-A样品空白）- （A试剂-A试剂空白）]×F F=C标准/[（A标准-A标准空白）- （A试剂-A试剂空白）]](http://slidesplayer.com/slide/11360539/61/images/10/%E5%9B%9B%E3%80%81%E8%AE%A1%E7%AE%97%EF%BC%9A+%E7%A3%B7%E6%B5%93%E5%BA%A6%3DA%E6%A0%B7%E5%93%81%2FA%E6%A0%87%E5%87%86%C3%97C%E6%A0%87%E5%87%86+%E8%83%86%E7%BA%A2%E7%B4%A0%E6%B5%93%E5%BA%A6%3D%5B%EF%BC%88A%E6%A0%B7%E5%93%81-A%E6%A0%B7%E5%93%81%E7%A9%BA%E7%99%BD%EF%BC%89-+%EF%BC%88A%E8%AF%95%E5%89%82-A%E8%AF%95%E5%89%82%E7%A9%BA%E7%99%BD%EF%BC%89%5D%C3%97F+F%3DC%E6%A0%87%E5%87%86%2F%5B%EF%BC%88A%E6%A0%87%E5%87%86-A%E6%A0%87%E5%87%86%E7%A9%BA%E7%99%BD%EF%BC%89-+%EF%BC%88A%E8%AF%95%E5%89%82-A%E8%AF%95%E5%89%82%E7%A9%BA%E7%99%BD%EF%BC%89%5D.jpg "四、计算： 磷浓度=A样品/A标准×C标准 胆红素浓度=[（A样品-A样品空白）- （A试剂-A试剂空白）]×F F=C标准/[（A标准-A标准空白）- （A试剂-A试剂空白）]")
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五.参考值： P: mmol/L T.Bili :5.1-19μ mol/L D.Bili :0-5.1μ mol/L
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六、注意事项： 1、测定器具（比色杯）必须用蒸馏水清洗，以免污染。 2、因胆红素遇光分解为胆绿素，因此采血后，应立即测定。 3、磷试剂内有强酸，切勿接触皮肤，不慎接触，立即水冲洗。
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