TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice

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1 TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice
植物生理學實驗 6 TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice 授課教授：傅士峯老師 助教：呂學宇、張凱雅 值日組：G6

2 實驗目的 利用薄膜層析法 (TLC) 分離葡萄與葡萄汁，檢測葡萄汁是否有其他非天然添加物

3 實驗原理 - 色層分析法 色層分析法(chromatography) 微量、快速分離有機化合物 依操作不同分類：
1. 氣相層析法 (Gas chromatography) 2. 液相層析法 (Liquid chromatography) ① 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) ② 管柱層析法 CC (Column Chromatography) ③ 濾紙層析法 PC (Paper Chromatography) ④ 高效率液相層析法 HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

4 實驗原理 - 薄膜層析法 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) 屬於吸附層析
 混合物中的各種成份對固定相的親合力 不同，當移動相 (展開液) 流經固定相時， 便會達到分離的目的  ① 固定相：是一片外層鍍上一層矽(Si)膠 的玻璃、塑膠片或鋁箔  極性  固定相親合力   滯留 ② 移動相：根據要分離的樣本選擇不同 極性的溶液  極性  固定相親合力   移動

5 實驗原理 - 薄膜層析法 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) 顯色
① 分離的物質是有顏色的，則可以肉眼在 薄片上看出顏色 ② 利用紫外光(UV light)照射  吸收紫外光而呈現黑點 ③ 合適的染色方法(呈色劑) 分析： 計算出Rf值

6 實驗原理 - Rf值 Rf值 (retention factor value) 一個化合物在薄層板上升的高度與展開劑上昇高度的比值
得到不同物質對固定相親合力數值相對比 該物質移動距離 公式： 展開液移動距離

7 實驗步驟

8 實驗器材 器材 數量 TLC 3 條 玻璃管 + 蓋子 3 組 研缽組 1(2)組 甲醇 3 ml 90%丙酮 1 ml 10 ml tip
鉛筆 1 尺 鑷子 實驗材料 3 種 注：TLC物直接用手拿取， 請用鑷子

9 實驗器材 控制組 實驗組 ① ② 實驗材料 葡萄 ( 含皮 ) 葡萄汁 紫蘇 綠色葉片 紫色食用色素

10 實驗器材 紫色食用色素 實驗組 紫蘇 綠色葉片 G1 G5 G9 G2 G6 G10 G3 G7 G11 G4 G8 G12 G13 ② 1

11 實驗步驟 用鉛筆輕輕的在TLC上畫記號 ① 從底部量 1.5 cm，在中央化垂直線 ② 從上方量 1 cm 配置萃取液：
依據下方表格，秤量指定物品後，放入研缽研磨 1 cm 10 cm 葡萄 ( 含皮 ) 葡萄汁 紫蘇 0.5g 紫蘇 + 1000ml 90%丙酮 綠色葉片 0.1g 葡萄 + 400ml 水 - 紫色食用色素 1.5 cm

12 實驗步驟 在十字交會點，用tip快速沾取並點上溶液，利用吹風機等待乾掉後，重複此步驟數次，當點的顏色深度可以覆蓋鉛筆筆跡即可 配置展開液：
依據表格，將不同展開液溶液加入玻璃管中，並輕輕蓋上蓋子 1 cm 注：① 點越小越好 ② 前一個點乾了才點下一個點 10 cm 葡萄 葡萄汁 紫色食用色素 1600 ml 甲醇 ml 90%丙酮 紫蘇 綠色葉片 1 c.c. 90%丙酮 + 1 c.c. 石油醚 1.5 cm

13 實驗步驟 用鑷子夾起TLC，打開蓋子，快速將TLC放置瓶子中央，並馬上蓋上蓋子 等待展開液到達第二條鉛筆線即馬上將TLC夾出

14 預期結果

15 預期結果 胡蘿蔔素  葉綠素a 葉綠素b 葉黃素 葡萄 X牌葡萄汁 Y牌葡萄汁 色素 日日春 紫蘇

16 實驗結果 放上「TLC結果圖」， 說明葡萄汁與葡萄在TLC結果上是否有差異？

17 問題與討論 與其他組比較 哪一牌的葡萄汁較接近原汁？哪一牌有加入食用色素？ 寫出紫蘇與綠色葉片TLC上有看到哪些光合色素？ 1 2 3 4
實驗組② 紫蘇 綠色葉片 紫色 食用色素 1 2 3 4 5 6 7 8 13 9 10 11 12

18 報告繳交 報告格式： 實驗目的、原理、結果、問題討論、 補充資料（自行整理）、心得 繳交期限：下週 (4/27) 課程結束前