一氧化碳中毒动物模型复制 和形态学技术实验

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1 一氧化碳中毒动物模型复制 和形态学技术实验
形态学中心实验室 贾雪梅

2 石 蜡 包 埋 技 术

3 目的和要求 1、熟悉石蜡包埋技术基本过程

4 在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。
原 理 在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。

5 石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。

6 操作步骤 1. 取材 直接取材或灌注后取新鲜组织 （不超过6h），切成3×5×2mm小块。
2. 固定 保持细胞原有形态和结构，解决组织 自溶问题。10%中性甲醛、4%多聚甲醛等。 3. 冲洗 自来水流水冲洗， 目的：停止固定液 对组织的作用，去除固定液，以免影响染色。

7 4. 脱水 通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。 60% (1h)→70% (1h)→80%酒精(1h)→ 90% (1h)→95%(2h)→ 100 %(2h) 注意: 脱水的具体时间视组织块 大小体积与厚度而定。

8 5.透明 透明剂常有二甲苯、冬青油等等。 6.浸蜡 将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过60oC，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。 方法：1/2石蜡→石蜡I→石蜡II→石蜡III。

9 7.包埋 将组织块和石蜡置于包埋框内， 冷却即成蜡块，组织获得了一定 硬度和韧度，就可以切成微薄的 切片。
包埋机

10 8.切片 载玻片先用蛋白甘油处理； Leica切片机进行切片，厚5μm； 45oC漂烘仪内进行展片。

11 9.裱片 将蜡片裱贴于载玻片上 10.烤片 将切片烤干待用 漂片仪

12 Nissl body 染色技术

13 1.熟悉Nissl body染色原理 2.掌握Nissl body染色操作方法
目的和要求 1.熟悉Nissl body染色原理 掌握Nissl body染色操作方法

14 原 理 尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。
原 理 尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。 机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。 尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。

15 材 料 1. 染色液、酒精、二甲苯等； 2. 染色缸、镊子、滤纸等；

16 操作步骤 1、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水 二甲苯20分钟 * 2次
100%酒精10分钟 %酒精 10分钟 %酒精 10分钟 %酒精 10分钟 蒸馏水 5分钟

17 2、染色：20~30分钟（600C温箱） 染液配制: 甲苯胺蓝 克 50%酒精 毫升 染后蒸馏水洗

18 4、脱水：100%酒精 10 ’’ X 2 5、透明：二甲苯 5 ’ X 2 6、封片：用中性树胶进行封片 7、观察：
3、分色：95%酒精分色 1-2’’，镜下控制 4、脱水：100%酒精 10 ’’ X 2 5、透明：二甲苯 5 ’ X 2 6、封片：用中性树胶进行封片 7、观察：

19 结 果

20 对照组 实验组