薄层色谱.

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1 薄层色谱

2 一 实验目的 1. 了解色谱法基本原理 2. 初步掌握薄层层析操作

3 二 实验原理 色谱法：又称层析法。是有机化合物分析、分离的重要方法之一。
原理：以相分配原理为依据。利用混合物中各组分在某一物质中的吸附、溶解性能的不同或其它亲和作用性能的差异，在混合物的溶液流经该种物质时，通过反复的吸附或分配作用，将各组分分开。 流动的混合物溶液称为流动相； 固定的物质称为固定相 根据操作条件的不同，色谱法分为：柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱。

4 在层析法中选用何种吸附剂视被分离的化合物性质而定。理想的吸附剂应具有如下条件：
1、能够可逆地吸附待层析物质 2. 不能使被吸附物质发生化学反应 3.粒度大小应使展开剂以均匀的流速通过 常用的吸附剂有：硅胶、纤维素、淀粉、氧化铝 影响色谱分离的另一因素是洗脱剂，洗脱剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素。溶剂极性越大，洗脱能力越大 溶剂极性如下： 己烷或石油醚< 环己烷< 四氯化碳 < 二硫化碳 < 甲苯 < 苯 < 二氯甲烷 < 氯仿 < 乙醚 < 乙酸乙酯 < 丙酮 < 乙醇 < 甲醇 < 水 < 乙酸

5 实验原理 薄层色谱：又称TLC。是将固定相均匀地涂在薄板， 依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。
适用于有机物的鉴定、纯度的检验、定量分离和反应过程的监控，而且常用于柱层析的先导，寻求事宜的分离条件。 操作过程如下：在洗净的玻璃板上均匀的涂上一样层吸附剂，干燥后，活化后，将样品溶液用毛细管点加于薄层板一端，晾干 后置盛有展开剂的展开槽内，待展开剂前沿接近顶端时，将色谱板取出，干燥后喷显色剂，或者在紫外灯下显色。 比移值：

6 实验原理 去痛片（索密痛）是应用最广泛的解热镇痛药，其主要成分有阿司匹林、非那西汀和咖啡因等，这几种成分都能用薄层色谱方法进行分析。
阿司匹林 非那西汀 咖啡因

7 三 本实验涉及的基本操作 1 薄层板的铺制与活化 2 用薄层色谱分析去痛片成分

8 四 实验仪器 载玻片 每人4片，使用后洗净，交给老师。 层析缸 每人一个 毛细管 每人2根 样品 去痛片4人一片 标准样：
载玻片 每人4片，使用后洗净，交给老师。 层析缸 每人一个 毛细管 每人2根 样品 去痛片4人一片 标准样： 2％咖啡因的乙醇溶液 2％非那西汀的乙醇溶液 流动相：12：1的1，2-二氯乙烷：乙酸， 0.5％的羧甲基纤维素钠水溶液，硅胶（GF254）

9 实验内容 （1）薄层板的制备 取载玻片 4片，洗净晾干。在50 mL烧杯中，放置3g 硅胶GF254，加入0.5％羧甲基纤维素钠水溶液8mL调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颠动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置1 h后，实验室整体放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温 0.5 h，取出，稍冷后备用。 制板时要求薄层平滑均匀，为此，应将吸附剂调得稍稀些，否则，吸附剂调得很稠，就很难做到均匀

10 （2）样品液的制备 四位同学一组,领取去痛片一片，用玻璃钉研成粉状。用一小块棉球塞住一支玻璃漏斗的颈部，将粉状药末转入其中，下面用小锥形瓶接液，取5ml 95％乙醇淋洗药末，萃取液收集备用。

11 实验内容 （3）点样 取2块制好的薄层板。分别在距一端1 cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线, 并用铅笔轻轻的画出所要点样的位置，取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起点线上点去痛片混合样。然后再点非那西汀、咖啡因，共点3个点。 另一块板上点去痛片混合样，然后再点阿司匹林样品。共点2个点。 点标准品时点样后的毛细管一定要放回原先的瓶中，以免误放造成标准品污染。点样时，使毛细管平面刚好接触到薄层即可，切勿点样过重而使薄层破坏。

12 实验内容 （4）展开 用12：1的1，2-二氯乙烷：乙酸为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的层析缸中进行展开，不要使样点浸入层析液中，点样一端应浸入展开剂0.5 cm，观察展开剂前沿上升至离板的上端0.5-1 cm处时取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后在紫外灯下观察分离的情况，确定去痛片成分。测定值和参考值误差在20％以下，即可认为可能为同一化合物。如误差超过 20％，则需重新点样并适当增加展开剂中醋酸的比例。 （5）由上面分析结果计算个组分的比移值，确定药片中的主要成分。