三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组 微生物学实验 Lab work on Microbiology 三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组 实验指导老师：涂璇

实验室环境、人体表面微生物检查和常用器皿的包扎 微生物实验一—— 实验室环境、人体表面微生物检查和常用器皿的包扎 一、常用器具和仪器 二、空玻璃器皿的包装 三、玻璃器皿的清洗 四、证明实验室环境与人体表面存在微生物 五、实验任务 六、思考题

一、常用器具和仪器 试管（test tube）

德汉氏小管（Durham tube） 1. Control ： Negative 2. S. aureus ： Acid 3. P. vulgaris ： Acid, Gas 4. P. aeruginosa ：Negative 5. E. coli ： Acid, Gas Control Acid + + + + Gas - - + +

玻璃吸管（glass pipette）

吸器

微量加样器（micropipette）

吸嘴（tip）

培养皿（petri dish）

三角瓶（erlenmeyer flask）

接种铲（inoculating shovel） 玻璃涂布器（glass spreader）

接种环（inoculating loop） 接种钩（ inoculating hook） 接种针（ inoculating needle）

小塑料离心管（Eppendorf tube）

双层瓶（double bottle） 滴瓶（dropper bottle）

酒精灯(alcohol burner） 煤气喷头（coal gas sprinkler head）

试剂瓶 量筒 烧杯

温度计 石棉网 漏斗

烘箱

卧式灭菌锅

手提式灭菌锅

无菌操作台/室

过滤除菌设备

厌氧操作设备

小型发酵罐

离心机

离心机

培养箱/摇床

培养箱/摇床

二、空玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装 方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌（见无菌操作技术）。 方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。

金属筒和内部的框架 包好的培养皿 塑料培养皿架

2、吸管的包装 准备好干燥的吸管，在粗头端塞入一小段棉花，以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。 将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，与报纸成45°角，左端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打个小结。 包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。或一起装入专用吸管筒进行灭菌。 如果一次可以用完，也可以将吸管直接装入筒内。尖端向内，使用时将筒平放在桌面上，手持粗端抽出。

3、试管和三角瓶的包装 试管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞，然后在外面用两层报纸包好，并用细线扎紧。若用铝箔更好，可以不用线扎。进行干热或湿热灭菌。

4、棉塞的制作： 棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好，所以好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全适合。 加塞时，棉塞长度的1/3在管口（瓶口）外，2/3在内。 一般用纤维长的棉花做塞子，不用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水变湿，造成污染。 此外，液体培养中还经常用到通气塞，即8层纱布重叠而成，或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。

制做棉塞

三、玻璃器皿的清洗 新玻璃器皿：用 2 %盐酸浸泡数小时后用自来水冲洗干净； 使用过的玻璃器皿：试管、培养皿、三角瓶等：用瓶刷沾去污粉等洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净；装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤； 玻璃吸管：使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内，以免干燥后不易清洗，再集中用自来水冲洗。 载玻片和盖玻片：滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾二甲苯擦去油，在肥皂水中煮沸5-10 min，用软布或脱脂棉擦拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡2 h，再用自来水和蒸馏水冲洗晾干后浸于95 %乙醇中备用。

注意： 带菌的器皿在洗涤前用 2 %煤酚皂溶液或 0.25 %新洁尔灭溶液等消毒液内浸泡 24 h或煮沸 30 min，再洗涤； 带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌，然后倒去培养物，再洗涤。

四、证明实验室环境与人体表面存在微生物 基本原理： 平板培养基含有微生物生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在 28～37 ℃ 温度下培养，1～3 天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种微生物所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。

1、培养皿做记号 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般在皿底上。用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察。 2、接种 （每人接种2只平皿） 用棉签接种实验室空气、台面及手指（洗手前和洗手后）、头发、咳嗽、鼻腔等。

五、实验任务 每人： 包扎4个平皿、1只吸管； 做2个试管塞、做1个三角瓶塞子并包扎好； 接种2只平皿。

六、思考题 1、记录实验结果，描写观察到的菌落形态。 2、比较各种不同来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？ 3、通过本次实验，在你防止培养物的污染与防止微生物的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？

结 束 请注意实验台面清洁！ 请值日生留下来打扫卫生！