四川大学医学检验系临床微生物教研室 陶传敏 乙型肝炎的病原学诊断 四川大学医学检验系临床微生物教研室 陶传敏 同学们,上节课我们已经讲授了病毒性肝炎的总论和甲型肝炎的病原学诊断,这节课我们将对乙型肝炎的病原学诊断作以讲解,乙型肝炎是5种病毒性肝炎感染人数最多的一种.

要点 简介 抗原组成 传染源 传播途径 病原学诊断 血清学模式及临床意义 End

病毒性肝炎- 背景 A E B D C 肠道传播 病毒性肝炎 NANB 肠道外传播 F, TTV ? 其它 Hepatitis Virus 肝炎病毒不是病毒分类学上的名称,它是特指专门引起肝炎的一组病毒 病毒性肝炎发病率高,传染性强,流行范围广,是全球最主要的传染病之一,我国将其定为乙类传染病 B D C F, TTV ? 其它 2

病毒性肝炎类型 A B C D E dsDNA(double srraind DNA)双链DNA(HBV:双链环状DNA) 传染源 血液/ 粪便 血液/ 血液/ 粪便 血源性物质/ 血源性物质/ 血源性物质/ 体液 体液 体液 传播途径 粪-口 经皮肤/ 经粘膜 经皮肤/ 经粘膜 经皮肤/ 经粘膜 粪-口 dsDNA(double srraind DNA)双链DNA(HBV:双链环状DNA) ssRNA(single straind RNA): 单链RNA(HAV:单股正链RNA; HCV:单股正链RNA; HDV: 单股负链RNA; HEV ) 慢性感染 否 是 是 是 否 基因组类型 ssRNA dsDNA ssRNA ssRNA ssRNA 3

Hepatitis B Virus 乙型肝炎的病原体 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感染 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达9.8%

Hepatitis B Virus 小球形颗粒、管形颗粒、Dane颗粒

HBV virion The infectious virion is called the DANE particle. 外衣壳,由脂质双层与蛋白质组成,HBV的表面抗原(HBsAg及少量PreS1,PreS2)即镶嵌于此脂质双层中 内衣壳:HBV核心抗原 其内部含有病毒的DNA和DNA多聚酶 The infectious virion is called the DANE particle.

小球形颗粒:由空心病毒包膜组成,成分为HBsAg,不含病毒核酸,无感染性，大量存在于血流中，是由HBV感染肝细胞时产生的过剩的病毒衣壳装配而成的 管形颗粒:成分与小球形颗粒相同，由小球形颗粒连接而成,其长短为一 Both comprised of HBsAg

HBV nomenclature HBV: hepatitis B virus HBsAg: hepatitis B virus surface antigen HBsAb: hepatitis B virus surface antibody HBcAg: hepatitis B virus core antigen HBcAb: hepatitis B virus core antibody HBeAg: hepatitis B virus e antigen HBeAb: hepatitis B virus e antibody

抗原组成(一)--HBsAg 位于病毒表面，是一种糖蛋白 4种亚型(adr,adw,ayr,ayw) 判断HBV感染的指标之一 Hepatitis B surface antigen Hepatitis B surface antibody

抗原组成(二)-- HBcAg 位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在血清中不易检出游离的HBcAg 主要成分是蛋白质 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中常可检出抗-HBc 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态 Hepatitis B core antigen Hepatitis B core antibody

抗原组成(三)-- HBeAg 位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消长动态相符合 血中HBeAg的出现可作为HBV复制及血清有感染性的指标 刺激机体产生抗-HBe 抗-HBe能与受染肝细胞表面的e抗原结合,通过补体介导破坏受染的肝细胞,抗-HBe的出现是预后良好的征象 抗-Hbe能与受染肝细胞表面的HBeAg结合，通过补体介导破坏受染的肝细胞，故对HBV感染有一定的保护作用 Hepatitis B e antigen

抗原组成(四)-- Pre-S抗原 位于HBV的外衣壳上，有两种 刺激机体产生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻断HBV与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转，趋向痊愈 前S1和前S2抗原能吸附于肝细胞受体的表位，抗前S1和抗前S2能通过阻断HBV与肝细胞结合而起抗病毒作用

传染源 患者 潜伏期 急性期 慢性期 无症状HBsAg携带者 患者和无症状携带者的血清均有传染性，且携带者和潜伏期患者更危险

各种体液中HBV的浓度 高 中等 低/不能检出 血液 精液 尿 血清 阴道分泌物 粪便 伤口渗出物 唾液 汗液 泪液 乳汁 1 1 1

HBV 传播途径 血源性传播 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等 剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等 母婴垂直传播 宫内传播 分娩时微小皮损处传播 产后母婴密切接触 性传播 性传播 肠道外传播（血液传播） 母婴垂直传播 - Mothers who are HBeAg positive are much more likely to transmit to their offspring than those who are not. Perinatal transmission is the main means of transmission in high prevalence populations 2 2 2

Global Patterns of Chronic HBV Infection 高 (>8%): 占45% 一生感染的危险 >60% 婴幼儿感染常见 中等 (2%-7%): 占43% 一生感染的危险是 20%-60% 感染存在于所有年龄组 低 (<2%): 占12% 一生感染的危险 <20% 许多感染发生在成人危险组 35

病原学诊断(一)--抗原抗体检测 项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBc IgM 方法 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最常用，定性) 发光免疫分析(定量) 反相间接血凝试验(少用) ELISA是将抗原或抗体吸附到固相载体上作为一种试剂来检测标本中有无相应的抗体或抗原的一种分析方法。 发光免疫分析：利用生物发光、化学发光或荧光标记来检测抗原抗体的分析方法。 反向间接血凝试验：用抗-HBs吸附于羊红细胞制成致敏红细胞，与标本中HBsAg结合时出现红细胞凝集。

ELISA的基本原理 利用抗原和抗体特异性结合 主要的试剂 固相抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物

ELISA的主要方法 间接法: 测定抗-HBs 夹心法：测定HBsAg和HBeAg 竞争法：测定抗-HBc 中和法：测定抗-HBe 捕捉法：测定抗-HBc IgM 图

病原学诊断(二)—核酸检测 核酸杂交 探针 PCR 引物

HBsAg – 感染的标志 Anti-HBs – 既往感染/接种疫苗 Anti-HBc IgM – 急性感染标志 Anti-HBc IgG – 既往或慢性感染 HBeAg – 急性病毒复制，有传染性 Anti-HBe –病毒不再复制 HBV-DNA – 急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应

血清学检测的临床意义 + - + - + + - - + + + - + - - - + - + + - + - - + - + - - - HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 + - + - + 急性或慢性感染(大三阳) + - - + + 乙肝后期或慢性感染(小三阳) + - + - - 潜伏期或急性乙肝早期 - + - + + 痊愈或恢复期,有免疫力 - + - - + 痊愈,有免疫力 - + - - - 疫苗接种或曾经感染过,有免疫力

Acute HBV Infection with Recovery Typical Serologic Course Symptoms HBeAg anti-HBe Total anti-HBc Titre IgM anti-HBc anti-HBs HBsAg HBsAg先阳性后消失；抗HBc IgM阳性且高效价；先HBeAg阳性，随后抗Hbe阳性；恢复期出现抗HBs HBV DNA先阳性后消失 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100 Weeks after Exposure 30

多发性结节性血管性肾炎 急性乙肝的转归

Progression to Chronic HBV Infection Typical Serologic Course Acute (6 months) Chronic (Years) HBeAg anti-HBe HBsAg Total anti-HBc Titre HBsAg持续阳性；抗HBcIgM低效价或者阴性；抗HBc总抗体阳性；HBeAg/抗Hbe阳性；抗HBs通常阴性 HBV DNA持续存在、效价高或低 IgM anti-HBc 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Years 小结 Weeks after Exposure 31

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