实验动物基本操作与血浆药物代谢半衰期测定 基础医学院 王丹丹 E-mail:wangdan2988@126.com
主要内容 实验目的 实验原理 实验动物 器材与药品 实验步骤 实验结果 注意事项
实验目的 掌握动物基本操作 1 掌握磺胺类药物血浆药物浓度以及半衰期的测定方法 2 了解药物血浆半衰期测定及计算的临床意义 3
实验原理 实验动物：根据科学研究的需要、定向培育而成的、供科学实验需要的对象和材料。它必须有明确的生物学特征和清楚的遗传背景，并经微生物控制和特定环境下驯化培育 实验用动物：用于实验的各种动物，它包括实验动物、家禽（畜）和野生动物。
实验原理 常用试验动物的生物学特性： ㈠ 青蛙和蟾蜍 ㈡ 小白鼠 ㈢ 家兔 ㈣ 大白鼠 ㈤ 其它 如猫、狗
实验原理 Free Bound 组织器官 体循环 吸收 游离型药 结合型药 代谢物 分布 排泄 生物转化 A D M E
1.多数药物在体内按一级动力学规律消除,静脉注射后，如以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，其时量关系常呈直线。 2.药物血浆半衰期（half life，T1/2）为： Ke = 2.303(logC1-logC2)/t2-t1
3.呈色原理： 偶氮化合物的显色深浅与磺胺的浓度有关。 磺胺类药物在酸性溶液中，与亚硝酸钠起重氮反应，生成重 氮盐。此重氮盐在碱性溶液中与酚类化合物起偶联反应，生 成橙红色的偶氮化合物。 偶氮化合物的显色深浅与磺胺的浓度有关。
实验对象 小白鼠、家兔
药品与器材 药品：20%乌拉坦，生理盐水 20%磺胺嘧啶钠溶液、1%肝素钠溶液、0.02%磺胺嘧啶钠溶液、7.5%三氯醋酸溶液、0.5%亚硝酸钠溶液、0.5%麝香草酚溶液、20%NaOH溶液、20%乌拉坦溶液、蒸馏水
器材：婴儿秤，兔台，小鼠灌胃器、哺乳动物手术器械一套，气管插管，动、静脉插管，结扎线，纱布，试管，电子天平,注射器
实验步骤 （一）小白鼠基本操作 1.抓取 2.腹腔注射 3.灌胃 4.处死 颈椎脱臼法
实验步骤 （二）家兔基本操作 1.实验准备：抓取-称重-麻醉-固定 2.气管插管 3.静脉插管 4.动脉插管 5.处死
实验步骤 1.家兔准备：抓取家兔一只，称重，用20％乌 拉坦溶液5ml/kg行耳缘静脉麻醉，然后固定 于手术台上。 角膜反射 夹趾反射
2.颈部手术 气管插管 备皮，分离皮下肌肉和组织，游离气管，穿线备用，在甲状软骨下3、4环状软骨之间做一“倒T型”切口，沿肺脏方向插入气管插管，结扎固定及二次固定。
颈外静脉插管 分离右侧颈外静脉1-2cm，穿两线备用，结扎远心端，剪一“V型”切口，静脉插管插入，结扎和二次结扎固定。
颈总动脉插管：找出一侧颈总动脉并分离约2～3cm左右，在其下穿线两根，一根结扎远心端，一端备用，对家兔进行全身肝素化：耳缘静脉注射肝素 2ml，用动脉夹夹住动脉近心端，在两线中间的动脉上剪一“V”形切口，插入肝素浸润过的动脉插管，用线结扎牢固以备取血用。
（三）代谢半衰期测定 1.取血 打开动脉夹取空白血样2ml置于用肝素浸过的试管中待用；然后由静脉注射20％的磺胺嘧啶钠溶液2ml/kg，于给药后10min及40min各取血2ml，分别置于同上试管中待用。
2.测定液和标准液的配制 测定液的配制：抽取上述血液各 0.2ml，置于盛有7.5％三氯醋酸溶液 5.8ml 的试管中充分摇匀，然后以 1500r/min，离心 5min 待用。 标准液的配制：取0.02％磺胺嘧啶钠溶液0.2ml，加入7.5％三氯醋酸溶液 5.8ml 中，摇匀待用。
3.各比色管的配制 成分 空白管（mL） 标准管 （mL） 测定管（mL） 给药前 给药10min 给药40min 测定液 （离心过后上清液） / 1.5 标准液 蒸馏水 0.5％NaNO2 0.5 0.5％麝香草酚 1.0
4.比色与计算 用722型分光光度计进行比色，选波长520nm，以空白管调“0”点，读出标准管及各测定管光密度，并按公式计算 T1/2。 CNaSD = C标/OD标×（OD给药后- OD给药前） Ke = 2.303(logC1-logC2)/t2-t1
实验结果 1.各比色管的光密度值 2.计算Ke 及T1/2 3.计算T1/2的临床意义 标准管 测定管 给药前 给药后 10 min
注意事项 1.麻醉时注意剂量和速度，并注意监测家兔反应。 2.注意各比色杯要匹配，吸取药液要准确。 3.每次取血之前要先将残血放掉。 4.各盛血的试管及动脉插管要用肝素浸润，动脉插管前要先注射肝素。 5.将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。 6.配制比色管的时候各个试管要做好标记。 7.加亚硝酸钠和麝香草酚的顺序不要混乱。 8.离心机使用前需要配平。
思考题 1.测定半衰期有何意义？ 2.测定半衰期时注意事项是什么？
Thank You! 请大家认真书写实验报告！ 每组一份！