血清总胆红素和结合胆红素的测定 董雷鸣
一、概述 1、胆红素的代谢 2、结合胆红素和未结合胆红素的概念
胆红素的代谢 1
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结合胆红素和未结合胆红素的概念 直接胆红素 未经肝脏处理的胆红素 经过肝脏处理,与葡萄糖醛酸(少量与硫酸)结合后的胆红素 间接胆红素 重氮试剂 未经肝脏处理的胆红素 经过肝脏处理,与葡萄糖醛酸(少量与硫酸)结合后的胆红素 间接胆红素
二、实验: 血清总胆红素和结合胆红素的测定
重氮反应法 胆红素氧化酶法 直接分光光度法 方法
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
原理 非结合胆红素 结合胆红素 咖啡因-苯甲酸钠 重氮试剂 偶氮胆红素 碱性酒石酸钠 总胆红素 偶氮胆红素
试剂 咖啡因-苯甲酸钠试剂 碱性酒石酸钠溶液 对氨基苯磺酸溶液 重氮试剂 叠氮钠溶液 胆红素标准液(100μmol/L)
操作 样品的测定 校正曲线的制作
样品的测定 加入物(ml) 总胆红素管 结合胆红素管 对照管 血清 0.2 咖啡因-苯甲酸钠 1.6 -- 对氨基苯磺酸 0.4 重氮试剂 37℃水浴10min 叠氮钠 0.05 1.55 碱性酒石酸 1.2 充分混匀，波长600nm，对照管调零。
校正曲线的制作 加入物(ml) 管 号 1 2 3 4 5 胆红素标准贮存液 (100μmol/L) -- 0.1 0.2 0.3 0.4 1 2 3 4 5 胆红素标准贮存液 (100μmol/L) -- 0.1 0.2 0.3 0.4 同一稀释用血清 相当于胆红素浓度 20 40 60 80 100 充分混匀，按总胆红素测定法操作。用0号管调零。
参考值 血清总胆红素 5.1~19μmol/L 血清结合胆红素 1.7~6.8μmol/L
临床意义 总胆红素 ——反映黄疸的程度 结合胆红素 ——鉴别黄疸的类型
注意事项 标准和标本应尽量避光 ——胆红素对光敏感 避免严重溶血 ——血红蛋白可与重氮试剂反应,产物可破坏偶氮胆红素 取空腹血 ——血脂对测定有一定的干扰
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