药 物 分 析 Pharmaceutical Analysis 第六章第二节 胺类药物的分析

胺类药物的分类 芳胺类 对氨基苯甲酸酯类 酰胺类 芳烃胺类 苯乙胺类 脂肪胺类 丙胺类 磺酰胺类

一 对氨基苯甲酸酯类药物的分析

对氨基苯甲酸酯类药物结构 基本结构

典型药物 盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride) 盐酸丁卡因（tetracaine hydrochloride) 苯佐卡因(benzocaine)

化学性质 重氮化-偶合反应 普鲁卡因 易氧化变色 苯佐卡因 1、芳基香第一胺特性 与芳醛缩合反应 2、水解性 普鲁卡因、苯佐卡因、丁卡因 重氮化-偶合反应 普鲁卡因 1、芳基香第一胺特性 与芳醛缩合反应 易氧化变色 苯佐卡因 2、水解性 普鲁卡因、苯佐卡因、丁卡因 3、弱碱性 普鲁卡因、丁卡因 4、游离碱难溶于水 普鲁卡因、丁卡因

鉴别试验 重氮化-偶合反应 水解反应 氯化物的反应 紫外分光光度法 红外分光光度法

杂质检查 盐酸普鲁卡因注射液 —— 对氨基苯甲酸 杂质来源 —— 水解产生 检查方法 —— TLC 杂质对照品法

含量测定 亚硝酸钠滴定法 非水溶液滴定法 高效液相色谱法

二 酰胺类药物的分析

酰胺类药物结构 基本结构

典型药物 （paracetamol） 对乙酰氨基酚 盐酸利多卡因 （lidocaine hydrochloride） 醋氨苯砜 （acedapsone）

化学性质 酯化反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 1、水解性 对乙酰氨基酚 〉盐酸利多卡因 2、水解产物 3、弱碱性 利多卡因 1、水解性 对乙酰氨基酚 〉盐酸利多卡因 芳香第一胺特性：对乙酰氨基酚 2、水解产物 酯化反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 3、弱碱性 利多卡因 4、酚羟基特性 对乙酰氨基酚 5、与重金属离子反应 盐酸利多卡因

鉴别试验 重氮化-偶合反应 三氯化铁反应 重金属离子反应 红外光谱法

杂质检查 乙醇溶液的澄清度与颜色 有关物质 对氨基酚 杂质来源：生产过程中的试剂 检查方法：比浊或比色 杂质来源：中间体、副产物及分解产物 检查方法：TLC 对氯乙酰苯胺：杂质对照品法 对氨基酚 杂质来源：中间体、水解产物 反应原理（原料药中检查）： 制剂中采用高效液相色谱法检查

含量测定 非水溶液滴定法 紫外分光光度法（原料药） 高效液相色谱法（制剂）

三 苯乙胺类药物的分析 基本结构

典型药物 肾上腺素（adrenaline） 盐酸异丙肾上腺素（isoprenaline hydrochloride） 重酒石酸去甲肾上腺素（noradrenaline bitartrate）

化学性质 1、弱碱性 具有烃氨基侧链，为仲胺氮，故显弱碱性。其游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。 1、弱碱性 具有烃氨基侧链，为仲胺氮，故显弱碱性。其游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。 2、酚羟基特性 具有邻苯二酚（或苯酚）结构，可与重金属离子配位呈色，露置空气中或遇光、热易氧化，色渐变深，在碱性溶液中更易氧化变色。 3、光学活性 多数药物分子结构中具有手性碳原子，具有旋光性。

鉴别试验 三氯化铁反应 甲醛-硫酸反应 氧化反应 亚硝基铁氰化钠反应 紫外特征吸收

杂质检查 酮体——肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素等药物在生产中均经相应的酮体还原而得，若还原不完全，可能引入酮体杂质。 检查方法——紫外分光光度法。 检查原理——利用酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身几乎没有吸收，限定其在λ310nm的A值，即可控制其酮体杂质的限量。

含量测定 非水溶液滴定法 溴量法 高效液相色谱法

重氮化-偶合反应

水解反应

亚硝酸钠滴定法 原理 结构中具有芳伯氨基或水解后呈芳伯氨基的药物，在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，反应终点用永停法指示。《中国药典》2005年版收载的苯佐卡因、盐酸普鲁卡都直接用本法测定。

测定的主要条件 1、溶液的酸度：加过量的盐酸有利于 ①重氮化反应速度加快； ②重氮盐在酸性溶液中稳定； ③防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。 2、测定的温度：测定一般在低温下进行。由于低温时反应太慢，经试验，可在室温（10～30℃）条件下进行。 3、滴定的速度：重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，所以滴定速度不宜过快。 4、加入适量溴化钾加速反应

指示终点的方法 1、外指示剂法：碘化钾-淀粉糊剂或试纸 2、永停滴定法：自动永停滴定仪

非水溶液滴定法 盐酸丁卡因侧链烃胺的叔胺氮具有碱性，可采用非水溶液滴定法测定含量。将供试品溶解在冰醋酸中，以结晶紫为指示剂，用高氯酸液（0.1mol/L）滴定至终点，溶液显绿色。 滴定前加醋酸汞，除去氢卤酸的干扰。 为增强丁卡因的碱性，可加入适量醋酐。

HPLC法 盐酸普鲁卡因注射液 ChP（2010） 可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸 是一种分离效率高、灵敏度高、选择性高的测定方法。

重氮化-偶合反应（潜在芳香第一胺）

三氯化铁反应

重金属离子反应 分子结构中具有芳酰胺的盐酸利多卡因，在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，转溶于氯仿中显黄色。盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因等，在同样条件下不发生此反应。 盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。 盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液，煮沸，显黄色；对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可与之区别。

非水溶液滴定法 盐酸利多卡因侧链烃胺的叔胺氮具有碱性，可采用非水溶液滴定法测定含量。将供试品溶解在冰醋酸中，以结晶紫为指示剂，用高氯酸液（0.1mol/L）滴定至终点，溶液显绿色。 滴定前加醋酸汞，除去氢卤酸的干扰。

紫外分光光度法 对乙酰氨基酚在0.4%氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，测定吸收度可用于其原料及其制剂的含量测定。该法较亚硝酸钠滴定法灵敏度高，操作简便。《中国药典》2010年版采用吸收系数法，测定对乙酰氨基酚原料、片剂、注射剂、栓剂及胶囊剂的含量。

三氯化铁反应 这是酚羟基的共同反应。肾上腺素等药物的分子结构中具有酚羟基，与Fe3+离子配位显色，加入碱性溶液，随即被Fe3+氧化而显紫色或紫红色，

甲醛-硫酸反应 苯乙胺类药物可在H2SO4中与甲醛反应，生成具有醌式结构的有色化合物。

氧化反应 肾上腺素被空气或其它弱氧化剂如H2O2或I2氧化后，生成肾上腺素红，放置可变为棕色多聚体。碱或重金属离子有催化作用。 盐酸异丙肾上腺素被I2氧化，生成异丙基肾上腺素红，加Na2S2O3使I2褪色。所以可利用此反应区别肾上腺素与去甲肾上腺素。

亚硝基铁氰化钠反应 重酒石酸间羟胺分子结构中具有伯氨基，加水溶解后，加亚硝基铁氰化钠试液、丙酮数滴与碳酸氢钠少量，加热后，即显红紫色。该反应为脂肪族伯胺的专属反应。试验中所用丙酮必须不含甲醛。

非水溶液滴定法 利用本类药物分子结构中的芳香第一胺或侧链烃胺基的弱碱性，以冰醋酸为溶剂，用结晶紫指示液指示终点。为消除滴定误差，滴定结果用空白试验校正。 如供试品碱性较弱，终点突跃不明显，可加入醋酐，提高其碱性，使终点突跃明显。 有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴定至HSO4-。

加入醋酸汞试液以消除氢卤酸的干扰。 盐酸苯乙双胍和盐酸克仑特罗的游离碱的碱性较弱，用指示剂指示终点时，终点不明显，难以判断，因此测定时采用电位滴定法。 冰醋酸溶解样品后，应放冷后再加醋酐，这样可防止氨基被乙酰化。乙酰化物碱性很弱，如为伯氨基的乙酰化物，以结晶紫为指示剂时不能被滴定，用电位滴定尚可测定，但突跃很小，会使滴定结果偏低。仲胺基的乙酰化物，以指示剂法和电位滴定法都不能被滴定。但在低温时可防止乙酰化。

溴量法 具有苯酚结构的本类药物，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可计算出供试品的含量。 如重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素等都可采用溴量法测定含量。

滴定反应：

高效液相色谱法 理论塔板数 系统适用性试验 分离度 拖尾因子 内标法 测定方法 外标法

对于重酒石酸去甲肾上腺素注射液的含量测定，《中国药典》2010年版采用高效液相色谱法测定。 色谱条件 色谱柱：使用十八烷基硅烷键合硅胶柱； 流动相 ：0.14%庚烷磺酸钠溶液-甲醇（65︰35），用磷酸调节pH至3.0±0.1； 流速：每分钟1 ml； 检测波长：280 nm； 理论板数：按重酒石酸去甲肾上腺素峰计算应不低于3000。