经穴部位的Ca2+是针刺效应产生的关键因素之一 郭义、王秀云、张艳军、胡利民 徐汤苹、 胡凤慧、苗文方、李桂兰、李建宇 天津中医学院.中国传统医药国际学院 张春煦 陈进生 姜萍 南开大学化学系

应该说，针刺效应的产生是多种因素共同作用的结果。影响针灸治疗效果的因素很多，如取穴、手法、施术时间、患者体质等。揭示针刺治疗原理，对提高临床疗效具有重要的意义。多年来，我们对钙离子在针刺疗效中的作用进行了研究，现将结果报告如下。

一.几种针刺效应动物模型的建立

1、研究依据、研究思路 针刺 经脉 效应 经脉•脏腑病变的调节 穴位 经脉者，所以决死生、处百病、调虚实 《灵枢•经脉篇》 夫十二经脉者、内属于腑脏、外络于肢节 《灵枢•海论篇》

2、动物模型的复制方法 （1）乌头碱引起心律失常模型 动物：家兔 方法：20ug/kg、0

（2）电刺激下丘脑引起的心律失常模型 动物：家兔 方法：用脑立体定位器固定家兔头部，打孔、参 照Sawyer图将金属电极插在下丘脑，给于20-30V、60Hz的电刺激 指标：观察心电图一定时间内早搏收缩出现的次数 穴位：内关 手法：平补平泻 5分钟

（3）实验性心肌梗塞模型 动物：大鼠 方法：乙醚麻醉后将大鼠固定，胸部备皮、消毒， 切开左胸部皮肤，从第四或第五肋间分离 肌层，打开胸腔、轻轻地压迫胸廓，挤出 心脏。从左心耳和动脉圆锥之间的冠状静 脉部位结扎冠 状动脉后，将心脏压回胸 腔，迅速缝合胸壁。 指标：缺血部的体积（用计算机分析） 血清酶:AST、CDH、α-HBOH、CK活性 穴位：内关 手法：平补平泻

（4）正常胃运动模型 动物：家兔 方法：麻醉后切开家兔的腹腔，取出胃， 将自制的传感器缝合于幽门部的 浆膜层处，将腹腔缝合，将导线 从颈部引出 指标：用计算机处理胃运动的振幅和频率 穴位：足三里 手法：平补平泻

（5）实验性胃运动亢进及抑制模型 动物：家兔 方法：和（4）的手术方式相同，肌肉 注射新斯的明造成胃运动亢进 ， 肌肉注射654-2（Anisodamine)， 造成胃运动抑制，摸索引起胃运 动亢进或抑制的药物的剂量 指标：用计算机处理计算胃运动的振幅和频率 穴位：足三里 手法：平补平泻

（6）实验性胃胀痛模型 动物：大鼠 方法：用三叉管的一端连接能扩张的小 球囊、一端连接水银检压计、 一端连接注射器，乙醚麻醉下， 将小球囊从口腔缓慢插入胃内， 然后，用注射器将空气注入小球 囊使其扩张，造成胃胀痛。 指标：大鼠出现胃胀的症状（四肢或头 部的扭动等），用血压计测定压力 穴位：足三里 手法：平补平泻

指标：胃排出率= 穴位：足三里 手法：平补平泻 （7）实验性胃损伤小鼠胃排空模型 动物：小鼠 方法：稀盐酸（0.3mol/l、1ml)灌胃造成胃损伤。将20个直径为0.5mm的黑色树脂球和10%可溶性淀粉糊一同注入胃中 指标：胃排出率= 肠排出的树脂球数目 灌入总数 × 100% 穴位：足三里 手法：平补平泻

经脉 心：手厥阴心包经（内关） 胃：足阳明胃经（足三里） 动物 大鼠、小鼠、大耳白家兔 穴位针刺时间 根据模型不同，一般3-5分钟、留针 综 上 所 述 经脉 心：手厥阴心包经（内关） 胃：足阳明胃经（足三里） 动物 大鼠、小鼠、大耳白家兔 穴位针刺时间 根据模型不同，一般3-5分钟、留针

二、穴位Ca2+浓度变化以及阻断 Ca2+活动环节对针刺效应的影响

1、络合穴位处Ca2+对针刺效应的影响 针刺 有效 心、胃病变 内关、足三里

（络合：使用EDTA溶液与Ca2+结合，使Ca2+失活） 针刺 无效 心、胃病变 内关、足三里 注射EDTA

EDTA络合Ca2+的浓度： 10-2M 、2.5× 10-3M 、 5× 10-4M 、 10-4M EDTA络合Ca2+的剂量: 家兔20ul、大鼠、小鼠5ul 结果： 10-2M 、2.5× 10-3M 、10-3M 的EDTA可以使针刺效果丧失。但是5×10-4M 、 10-4M EDTA穴位注射，针刺效果仍然存在。 证明10-3M 的EDTA是使针刺效果丧失最低浓度。

EDTA对照液 ，在体外已结合上Ca2+的EDTA溶液 针刺 有效 心、胃病变 内关、足三里 注射EDTA 对照液

2、阻断穴位细胞细胞膜上VOCs对针刺 效应的影响 心胃的病变 无效 经脉 内 关 足三里 针刺 2、阻断穴位细胞细胞膜上VOCs对针刺 效应的影响

VOCs阻断剂的种类和浓度： 10-3M Mn(NO3)2 20ul 2× 10-3M 二异搏定 20ul 5× 10-4M 心痛定 20ul 给药方法： 1、微量注射器穴位注射 2、微量蠕动泵穴位连续灌流

注：VOCs阻断剂对照液NaNO3溶液，剂量与 心胃的病变 有效 经脉 内 关 足三里 针刺 注：VOCs阻断剂对照液NaNO3溶液，剂量与 VOCs阻断剂相同

3、阻断CaM活性对针刺效应的影响 三氟啦嗪 胃抑制模型 无效 经脉 足三里 三氟啦嗪剂量：10ul 浓度：60um 针刺

生理食盐水注射 胃抑制模型 有效 经脉 足三里 针刺

4、升高穴位Ca2+浓度对针刺 效能的影响 有效 针刺 经脉 内 关 CaCl2溶液穴位注射 心胃病变 足三里 内 关 足三里 针刺 4、升高穴位Ca2+浓度对针刺 效能的影响 CaCl2 溶液的浓度：10-1M、10-2M、5×10-3M、 10-3M

升高穴位处的Ca2+后针刺效能继续存在，与单纯针刺相比无显著的统计学差异，原因有待进一步研究。上海蔡震亨听了我们的报告后，以油性Ca2+穴位注射治疗哮喘，取得了较好的疗效。

三、经脉线上Ca2+浓度变化及阻断 Ca2+活动环节对针刺效应的影响

1、降低经脉上几处Ca2+浓度对针刺 效应的影响 无效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示EDTA注射的部位。经脉线上的某个穴位或经脉线上非穴位处，每次实验仅在一处注射，EDTA的剂量、浓度与上述相同。研究表明使针刺效能消失的最小浓度为10–3M

表示EDTA对照液注射部位，体外EDTA络合钙 溶液，其浓度、剂量与上述相同。 （2） 有效 针刺 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示EDTA对照液注射部位，体外EDTA络合钙 溶液，其浓度、剂量与上述相同。

表示EDTA注射的部位，经脉线两旁。注射剂量与注射 方法与上述实验相同，部位对照实验。 （3） 有效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变 表示EDTA注射的部位，经脉线两旁。注射剂量与注射 方法与上述实验相同，部位对照实验。

表示阻断部位。阻断剂种类、剂量、浓度、给药方法同前，阻断部位：经脉线上的穴位或在经、非穴处。每次实验阻断一处。 2、阻断经脉线上几处细胞细胞膜 上VOCs对针刺效果的影响 针刺 无效 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示阻断部位。阻断剂种类、剂量、浓度、给药方法同前，阻断部位：经脉线上的穴位或在经、非穴处。每次实验阻断一处。

表示阻断剂对照液注射部位。药物种类、剂量、浓度同二2（2）。药物对照实验。 有效 针刺 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示阻断剂对照液注射部位。药物种类、剂量、浓度同二2（2）。药物对照实验。

表示经脉线两旁阻断部位。药物种类、剂量、浓度同三2（1）。部位对照实验。 （3） 有效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变 表示经脉线两旁阻断部位。药物种类、剂量、浓度同三2（1）。部位对照实验。

表示三氟啦泰注射部位。浓度、剂量同二3（1） 3、经脉线上CaM活性阻断对针刺效果的 影响 无效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示三氟啦泰注射部位。浓度、剂量同二3（1）

（2） 有效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示生理盐水注射部位。剂量10ul

（3） 有效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示三氟啦泰注射部位。经络线两旁

4、经脉线Ca2+浓度的上升对针刺效能的影响 有效 内 关 足三里 经脉 心胃病变 升高Ca2+浓度的部位。药物剂量、浓度同二4

四、Ca2+络合针刺效能丧失现象的 原理初探

用电生理的方法记录正中神经干复合动作电位 1、 实验性心律异常 有效 内 关 电针 用电生理的方法记录正中神经干复合动作电位

EDTA浓度：10-1M、 10-3M EDTA 剂量：20ul 无效 电针 EDTA注射 内 关 内 关 足三里 实验性心律异常 正中神经干复合动作电位与1存在统计学差异 EDTA浓度：10-1M、 10-3M EDTA 剂量：20ul