实 验 五　 肠杆菌科检验（一） 西安医学院 病原生物学与免疫学教研室

目的要求 掌握： 肠杆菌科的共同特性和微生物学检查； 肠道杆菌的主要生化反应； 粪便标本中肠道致病菌分离培养的基本程序。 熟悉： Xi’an Ｍedical University 目的要求 掌握： 肠杆菌科的共同特性和微生物学检查； 肠道杆菌的主要生化反应； 粪便标本中肠道致病菌分离培养的基本程序。 熟悉： 粪便标本中肠道致病菌分离与初步鉴定的操作。 微免教研室

实验内容 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学 反应 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 微免教研室 Xi’an Ｍedical University 实验内容 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学 反应 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 形态特征（示教） 革兰阴性短杆菌，多数有周鞭毛，有荚膜或微荚膜，有菌毛，无芽胞。 故肠道杆菌的染色镜检只能初步判断，不能做为肠道杆菌的鉴别依据。 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 培养特性及主要生化反应（示教） 肠道杆菌营养要求不高，在普通培养基上能生长，大多形成中等大小，表面光滑、形态相似的菌落，因而也不能作为鉴别的依据。但它们生化反应活泼，对糖和蛋白质可产生不同的代谢产物，可借生化反应鉴别各种肠道菌，特别是 肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多数分解乳糖， 临床上常用此特性分离肠道致病菌。 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 培养特性及主要生化反应 常见用于分离培养肠道病原菌的选择或鉴别培养基： S S琼脂平板、 EMB琼脂平板 双糖铁培养基 五糖发酵管（葡乳麦甘蔗） 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 S S 琼脂平板 （沙门志贺菌属琼脂培养基） 分解乳糖细菌，菌落呈红色。 不分解乳糖细菌，菌落无色。 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 2. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基） 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色） 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 3. 双糖铁培养基 用途： 检测细菌对乳糖和葡萄糖利用能力的不同，是 否产生H2S。 观察方法： 上层含乳糖部分 乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色 然后观察下层 发酵葡萄糖（产酸产气） H2S：培养基呈黑色 乳糖 葡萄糖 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 ４. 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 组成：蛋白胨水＋色氨酸 原理：某些细菌有色氨酸酶分解色氨酸 产生吲哚（无色），加入柯 氏试剂后形成玫瑰吲哚（红色）。 结果：液面形成玫瑰红色 微免教研室

一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 Xi’an Ｍedical University 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 ５. 微量糖发酵管 微免教研室

微免教研室 Xi’an Ｍedical University 几种主要肠道杆菌的鉴别要点 ＋/- 菌 名 鉴别培养基 EMB平板 SS平板 菌 名 鉴别培养基 EMB平板 SS平板 双糖铁培养基（KIA） 斜面 底层 气体 H2S乳糖 葡萄糖 动力 吲哚 五糖发酵管 葡 乳 麦 甘 蔗 大 肠 埃希菌 肖 氏 沙门菌 伤 寒 志贺菌 菌落蓝紫色、 同前， 圆形、带 菌落 金属光泽、 呈红色。 圆形不透明， 直径2~3mm 左右。 菌落无色、 同前， 半透明、 菌落 直径1～ 常带黑心。 2mm左右。 菌落无色、 同前 半透明、 直径1~2mm 同上 同前 A A ＋ － K A － ＋＋ K A － －/＋ K A － － ＋ ＋ ＋ － － － ＋/- － － ＋ － ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 微免教研室

二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 Xi’an Ｍedical University 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 粪便标本或肛拭子 分离培养（划线接种） 第一天 37℃18～24h SS平板 EMB平板 挑选可疑菌落进一步鉴定 第二天 生化反应鉴定 血清学鉴定 第三天 （用相应诊断血清做玻片凝集试验） 报告结果 微免教研室

二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 Xi’an Ｍedical University 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 操作内容 (一) 双糖铁培养基的接种 1、接种方法： 取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于半固体双糖铁培养基上。 培养基采用高层穿刺、斜面密布划线接种法。 微免教研室

二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 Xi’an Ｍedical University 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 2、结果判定： 乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 大肠杆菌 黄色 黄色 + - 痢疾杆菌 红色 黄色 - - 伤寒杆菌 红色 黄色 + +/- 副伤寒杆菌 红色 黄色 + + 微免教研室

二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 Xi’an Ｍedical University 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 操作内容 (二) 吲哚试验 1、接种蛋白胨水培养基： 取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于蛋白胨水培养基中。 2、结果判定： 液面形成玫瑰红色者为吲哚试验（＋）； 无变化者为吲哚试验（－）。 微免教研室

二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 Xi’an Ｍedical University 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 操作内容 (三) 微量糖发酵管接种 1、接种微量糖发酵管： 取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于微量糖发酵管中。 2、结果判定： 反应现象 结果描述 酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气（　） 酸性变色、无气泡 分解××糖产酸、不产气（　） 培养基不变色 不分解××糖 微免教研室

Xi’an Ｍedical University 思 考 讨 论 大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌的鉴别要点？ 微免教研室

实 验 报 告 1、记录粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序。 2、记录肠道杆菌的双糖铁、蛋白胨水、半固体及微量糖发酵管接种结果并分析。 Xi’an Ｍedical University 实 验 报 告 1、记录粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序。 2、记录肠道杆菌的双糖铁、蛋白胨水、半固体及微量糖发酵管接种结果并分析。 微免教研室

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