Frequently Asked Questions Heterophilic Blocking Reagent Frequently Asked Questions 異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q1. 什麼時候會需要HBR? 正在發展三明治免疫檢測。 曾有檢測到假陽性反應之檢體。 確認檢體為假陽性，而非真陽性檢體。 檢測結果受到HAMA或異嗜性抗體干擾。 查出影響檢測結果之假陽性檢體類別。 檢測需要阻滯劑。阻滯劑為HAMA阻滯劑或異嗜性阻滯試劑? 需要一個通用阻滯劑加至各種檢測系統。 評估一個阻滯劑的要素。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q2. 何謂異嗜性抗體干擾? 病人血清/血漿中的內生性異嗜性抗體，可結合其它屬種的免疫球蛋白，包括用來產生抗體並作為免疫分析試劑的屬種 (species)。 這些抗體會干擾免疫分析系統，造成比實際分析物濃度更高的檢測值，因此有誤判檢體的可能。 雖然異嗜性抗體可以影響各樣檢測，其主要作用於三明治免疫分析系統。 “三明治”法至少使用兩種針對不同表位 (epitode) 抗原的抗體，其一抗體為固相 (solid phase)，另一則是在溶液中，有如125I ，酵素，螢光劑，化學冷光等標幟物。一般而言，檢體中之抗原與兩抗體結合，標幟抗體與固相相結合的數量與檢體內的抗原濃度成正比（圖1）。 不過， 異嗜性抗體在無抗原的情況下，也可連結這兩個抗體，因而增加結合標幟抗體 (labeled antibody)的濃度（圖2 ）。 圖 1 圖 2 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q3. HBR 如何有效地阻滯異嗜性抗體? 一般的被動阻滯法，使用非特異性物質（鼠IgG ，鼠血清，非特異性的單株抗體，凝聚 IgG等) ，阻滯人類異嗜性抗體的結合 (binding)。所有方法皆依賴人類異嗜性抗體之親和力 (affinity) 來影響阻滯。一般人類異嗜性抗體的親和力約在 K-value =105-106 的範圍內。 HBR 以完全不同的方法來完成結合。 HBR 是一個特定的結合劑 (binder)，直接針對人類異嗜性抗體。當 HBR 連結人體異嗜性抗體時，是利用立體阻隔效應 (steric hinderance) 來阻滯。HBR 結合劑之親和力約在 K-value = 109 的範圍內 。由於 HBR 的親和力較高，可有效地與人類異嗜性抗體結合，以達到阻滯的功效。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q4. HBR 超越了一般阻滯方法? HBR 的特異性結合反應，加上1000倍以上的親和力，使得 HBR 具有以下優點，超越傳統阻滯方法： 3. HBR 可阻滯所有anti-屬種 (anti-rabbit, anti-goat, anti-sheep, 和 anti- mouse) 反應。 4. HBR 可阻滯所有抗鼠單株抗體的 subtypes (如anti-mouse IgG1, anti-mouse IgG2等) 5. 使用 HBR，不限定於某些檢測。如同某些狀況，使用分析物特異 單株抗體用以作阻滯。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q5. 異嗜性抗體干擾到底是什麼? 干擾因素是免疫球蛋白，目前已發現有 IgG 和 IgM 異嗜性抗體。 發生機率極高。依病人人口而別，目前有高達40 ％的發生率，至少有10 ％的案例已被存檔 (documented) 備查。 不同檢體有不同程度的干擾，單一病人體內的干擾程度也會隨著時間而變化。 異嗜性抗體並非針對特定屬種，但可與多種動物抗體結合。因此，干擾非僅限於以單株抗體為基礎的檢測。 干擾可能是藉由檢測系統內的抗體 Fc 部位所傳達。 異嗜性抗體並非單一和特異的實體，而是一個多成份 (multi-component) 的現象，由多種抗體所構成，可引發干擾，某些或全部抗體可能只存在於特定的檢體中。 EIA 似乎較 RIA 容易受到干擾，這可能是因為抗體的 Fc 部份在鏈結 (conjugation) 時多數被改變，故較易受影響。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q6. 異嗜性抗體從何處來? 有許多可誘發病人身體產生異嗜性抗體的因素，其中包括： 類風濕性關節炎 (慢性發炎性) 注射疫苗 流行性感冒 動物接觸 (飼養寵物) 過敏 特定食物 (乳酪) 輸血 動物輔助治療 (胸腺細胞,羊細胞,胚胎細胞) 自體免疫疾病 (AIDS) 血液透析 免疫抑制藥物(OKT3) 母性傳送 心肌病變 腸胃炎 (E. Coli) 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q7. 如何偵測異嗜性抗體干擾? 可採取以下方法來分辨假陽性和偵測異嗜性抗體干擾： 檢測數據和臨床診斷或其它檢測不符。 通常表現正常的某些檢體，經稀釋後表現數據不一致。 利用親和層析法，將特定分析物自檢體中排除，以確定信號是否已被排除，若訊號仍在，即為假陽性。 加入異嗜性抗體阻滯劑，觀察檢測值是否降低。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

異嗜性抗體 HAMA Q8. 異嗜性抗體和 HAMA 有何不同? 異嗜性抗體只是一個通稱，用來形容所有可結合動物抗體的人類抗體，並對檢測造成干擾。 HAMA (Human anti- mouse antibody, 人類抗 鼠抗體)，是異嗜性抗 體的一種，可與鼠抗體結合。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q9. 何謂阻滯劑 (Blocking Reagent)? 阻滯劑是一種生物製劑，一旦加入免疫分析系統中，可有效防止異嗜性干擾，以避免在無抗原的情況下連結兩個 (補捉及標幟) 抗體。 目前有兩種主要的阻滯劑： (1) HAMA (human anti-mouse antibodies) (2) 異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與阻滯試管(HBT) 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q9. 何謂阻滯劑 (Blocking Reagent)? (1) HAMA HAMA只阻滯一種特異的人類抗屬種抗體之活性（如人類抗鼠抗體），通常為非針對目標分析物的正常血清，正常 IgG ，單株抗體等。 將這些“被動阻滯劑 (passive blocking agents)” ，過量加入於檢體中，使得檢體中任何特異抗屬種抗體，易與低濃度之特異免疫反應物結合。 這些試劑用途有限，因為僅能排除異嗜性干擾的一部份，而異嗜性干擾牽涉許多成份。常觀察到的是，將鼠 IgG 加至一雙單株 (double monoclonal) 抗體三明治檢測時，只能改正部份異嗜性干擾。 (2) 真正異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與試管 (HBT) 這些製劑可排除各類型的異嗜性干擾。 內含“主動阻斷試劑 (active blocking reagents) “ ，是直接針對造成干擾的異嗜性抗體。 只需低濃度即可達預期的功效，降低任何影響免疫反應的不良效應，並有效增強阻斷動能 (kinetics)。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q10. HBR 的表現特性 HBR 阻滯下列假陽性反應: a. 人類抗鼠抗體（HAMA） b. 人類抗山羊抗體 c. 人類抗羊抗體 d. 人類抗兔抗體 e. 類風濕因子 廣泛特異性表示 Scantibodies HBR 可做為 “通用試劑”，適用於二部位免疫分析檢測，抗體為固相或標幟試劑。 為一高特異性及高純度的試劑， 極低濃度的 Scantibodies HBR 即夠用(有時比正常鼠 IgG 少百倍或千倍），乃使檢測信號夠大，不受不良影響。 Scantibodies HBR 不干擾人類血清中分析物之加入 (spike) 或還原 (recovery)。 Scantibodies HBR 不干擾真正陽性病人檢體的稀釋線性。 Scantibodies HBR 批與批之間重複性 (reproducibility) 極高。 Scantibodies HBR 效期五年內品質穩定。 在檢測中使用Scantibodies HBR，比使用鼠IgG或鼠血清的成本為低。 Scantibodies HBR 可直接加入檢測緩衝劑、鏈結物 (conjugates) 等。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q11. 辨識假陽性 Scantibodies已成功找出會引起假陽性結果的捐助者 (donors)。這些 捐助者的檢體，最難以傳統方法（鼠IgG等）阻斷其異嗜性干擾。 這些檢體可用以辨識假陽性反應，並用來評估異嗜性干擾對檢測的 影響。 請注意假陽性檢體往往有檢測特異性。因此，這些檢體在某些檢測 中，可能不會顯示假陽性。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

Q12. HBR相關文獻 Prevalence of Heterophilic Antibody Interference in Eight Automated Tumor Marker Immunoassays Clinical Chemistry 51, No. 1, 2005 Techniques for Identifying Heterophile Antibody Interference Are Assay Specific: Study of Seven Analytes on Two Automated Immunoassay Analyzers Clinical Chemistry 51, No. 3, 2005 A Hyperthyroid Patient with Measurable Thyroid-stimulating Hormone Concentration – A Trap for the Unwary Annals Academy of Medicine 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158