第十九章 平面色谱法 Plane chromatography 第一节 分类和原理 第二节 薄层色谱 第三节 纸色谱法 2017/4/9

第一节 分类和原理 一、分类 薄层色谱法； 纸色谱法; 薄层电泳法； 2017/4/9

纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用动力源。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。 2017/4/9

将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。原理与柱色谱相同。 2017/4/9

二、参 数 Rf=L/Lo (一）定性参数： 比移值 :溶质移动距离与流动相移动距离之比 前沿 Rf=L/Lo Rf值在0.2－0.8之间一般，在0.3－0.5之间最佳 原点 相对比移值 Rr= Rf(i)/ Rf(s)=Li/Ls 2017/4/9

（二）相平衡参数——分配系数和容量因子 R’—— 流动相中停留的时间分数，单位时间内 一个分子在流动相中出现的几率。 (1- R’)/R’=Xs/Xm=CsVs/(CmVm)=KVs/Vm=k R’=1/(1+k) R’也可表示组分分子在面上移动的速度。 Rf ＝L/L0=ut/u0t= R’=1/(1+k) 2017/4/9

分离度：R=(L2-L1)/[(W1+W2)/2]=2d/(W1+W2)＞1 （三）面效参数： 理论塔板数 n=16(L/W)2 塔板高度 H=L0/n （四）分离参数： 分离度：R=(L2-L1)/[(W1+W2)/2]=2d/(W1+W2)＞1 分离数SN: (R＝1.177时） Rf=0到Rf=1容纳斑点数 SN=L0/(b0+b1) -1 Rf=0时组分的半峰宽 Rf=1时组分的半峰宽 b0和b1是通过测定其它组分的Rf值和半峰宽，二者在一定点样量范围内成直线关系，用回归方程求得。 2017/4/9

第二节 薄层色谱 一、类型：吸附色谱、分配色谱 1、吸附色谱：固定相为吸附剂。A、B两组分在 薄层板上经过－－－ 解 吸 再吸附 再解吸 解 吸 再吸附 再解吸 吸附 由于两组分在固定相的吸附能力不同，展开剂对两组的溶解能力的不同，即吸附系数不同，移动速度不同。极性大的组分迁移速度慢，Rf小。 2017/4/9

2、分配色谱： 利用试样中各组分在固定相与流动相之间的分配系数的不同，各组分在板上的迁移速度不同而获得分离的薄层色谱法。 正相色谱：流动相的极性比固定相的极性小。 例： Si-OH表面吸附17％水为固定相， 极性较强，流动相用弱极性溶剂正相分配色谱。 极性大的组分Rf小。 反相色谱：流动相的极性比固定相的极性大。 极性大的组分Rf大。 2017/4/9

（一） 吸附剂(层析板): 吸附色谱固定相， 二、吸附剂，展开剂 （一） 吸附剂(层析板): 吸附色谱固定相， 用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，10～40µm）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.15～0.5mm），干燥活化后即可使用。 1 硅胶： 表面带有 硅醇基 ≡Si—O—H 吸附中心 氢键 极性基团 各组分的极性基团与硅醇基形成氢键的能力不同而被分离 2017/4/9

活化去水，增加吸附位点。 2、氧化铝： 2017/4/9

吸附剂的活度与含水量的关系 活性级 硅胶含水量％ 氧化铝含水量％ Ⅰ Ⅱ 5 3 Ⅲ 15 6 Ⅳ 25 10 Ⅴ 38 Ⅱ 5 3 Ⅲ 15 6 Ⅳ 25 10 Ⅴ 38 活化去水，增加吸附位点。 2017/4/9

（二）展开剂(溶剂)： 吸附剂 展开剂 被分离的物质 由一种或多种溶剂按一定比例组成。 C B C B A A 活泼 极性 不活泼 非极性 * 由一种或多种溶剂按一定比例组成。 活泼 极性 吸附剂 C 展开剂 B C 不活泼 B 非极性 极性 A A 非极性 被分离的物质 2017/4/9

三、 操作方法： 1 制备：涂板，活化，样品处理 1 制备：涂板，活化，样品处理 2 点样：用微量注射器或玻 璃毛细管吸 取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。 (2－4mm，0.01－0.1%, nmL) 2017/4/9

3 展开：随时间t延长，展开速度变慢边缘效应,先饱和. 4 显色、检测:有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。 2017/4/9

四 定性，定量 1 定性：Rf 2 定量： 洗脱法:洗脱，收集，用其他方法检测 直接定量法：荧光,可见,紫外透过率 2017/4/9

五、 高效薄层色谱法 吸附剂颗粒小，n大，R高 六 薄层扫描 线形扫描： 斑点规则， 浓度均匀。 2017/4/9

曲折形扫描： 斑点不规则， 浓度不均匀。 2017/4/9

第三节 纸色谱法 一.纸色谱法的分离原理：分配色谱 纸——载体。吸附水为固定相，正相色谱 2017/4/9

特点及应用 优点 平板色谱简单、方便、及操作费用低， 可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开。 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开 即按一般方法展开后，改变方向和展开剂 再次展开，进一步改善分离效果。 试样一般不需要经过预处理即可分离。 2017/4/9

缺点 应用： 分离效率较低，不适用挥发性试样分离。定性定量不便。 平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。 2017/4/9