Experiment of Medical Microbiology 医学微生物实验 Experiment of Medical Microbiology
微生物实验目的 巩固基础理论、基本概念 学习基本操作 树立无菌概念
实验室规则： 1.必须穿白大衣； 2.尽量保持安静； 3.自己的实验器材(试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名； 4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸； 5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。 6.实验结束后，泡手、洗手。
细菌的培养法
营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 细菌生长繁殖必要条件 营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体 培养基的定义 微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基 质，一般pH为7.2~7.6，高压灭菌后使用。
培养基分类 按其营养组成和用途不同 基础培养基： 营养培养基： 选择培养基： 鉴别培养基： 厌氧培养基：
按物理状态不同 液体培养基: 用于大量繁殖细菌 固体培养基: 液体培养基中加入1.5%~2.5%琼脂粉，用于细菌分离和纯化 半固体培养基: 琼脂粉含量在0.3%~0.5%， 用于观察细菌的动力和短期保存菌种
细菌在培养基中的生长情况 液体培养基：表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
固体培养基：菌落，菌苔 分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开，称分离培养。 菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。 纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌为纯种，称为纯培养。
半固体培养基： 无动力 有动力
细菌培养的应用 在医学中的应用 感染性疾病的病原学诊断 细菌学的研究 生物制品的制备 在工农业生产中的应用 在基因工程中的应用
实验三 细菌的培养 目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术 培养基 菌种 方法 普通琼脂平板 大肠、金葡混和菌液 平板划线 实验三 细菌的培养 目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术 2人/组 培养基 菌种 方法 普通琼脂平板 大肠、金葡混和菌液 平板划线 斜面培养基 大肠杆菌 斜面划线 肉汤培养基 大肠、枯草杆菌 液体接种 半固体培养基 变形、痢疾杆菌 穿刺接种
four-area streak plate technique 1/10 II I 1/5 Flame loop Rotate 90 Flame loop Rotate 90 III 1/4 IV Rotate 90
液体接种
斜面接种
细菌的形态和结构
细菌的形态和结构 细菌基本形态： 球菌 螺 形 菌 杆菌
细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质 细菌特殊结构： Capsule Spore Flagella Pilus？？？
细菌的形态和结构 ：观察示教片：9张 观察内容 示教片 重点观察 细菌 基本 形态 球菌 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌 形状、大小、排列方式 杆菌 大肠杆菌 炭疽杆菌 弧菌 霍乱弧菌 特殊 结构 荚膜 肺炎球菌 荚膜大小与菌体的关系 芽胞 破伤风梭菌 芽胞在菌体上的位置、大小 鞭毛 变形杆菌 鞭毛的形态、数量、位置
真菌形态的观察
真菌的菌落形态 1.新生隐球菌：酵母型菌落；类似细菌菌落； 2.白假丝酵母菌：类酵母菌落(酵母样菌落)； 3.霉菌：丝状菌落；多细胞真菌的菌落形式。
真菌镜下形态观察 1.霉菌小培养：菌丝，孢子 2.新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子 3.白假丝酵母菌：厚膜孢子、假菌丝
革兰染色法 菌种：两个单菌落E、S 试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄 材料：酒精灯、接种环、玻片、 步骤 ①涂片 ②自然干燥 ③固定 ④染色 初染：结晶紫，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 媒染：碘液， 1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 脱色：95％乙醇数滴，时间半分钟（30秒），用水冲洗。 复染：沙黄， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ⑤滤纸吸干，油镜观察。
抗酸染色法 标本：结核病人痰涂片，枯草涂片 试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰 步骤 ①固定 ②染色 初染：石炭酸复红数滴，时间8~10分钟，用水冲洗。 脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.5~1分钟（30秒），用水冲洗。 复染：碱性美兰， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ③滤纸吸干，油镜观察。