生物化学实验用水 诊断试剂盒的选择与使用

实验用纯水 水是常用的溶剂，天然水中含有许多杂质。 天然水经过简单的物理、化学方法处理，除去悬浮物和部分无机盐即得到自来水。 天然水和自来水经蒸馏，电渗析等处理，进一步除去杂质，即成实验用纯水。 实验用纯水并非不含任何杂质，其质量高低直接影响到所配试剂的质量并影响实验结果的准确度和精密度 。

天然水 自来水 实验用纯水 经蒸馏、电渗析等处理，除去杂质 经简单的物理、化学方法处理，除去悬浮物质和部分无机盐 (悬浮物,胶体物质,溶解物质) 经蒸馏、电渗析等处理，除去杂质

实验室用水国家标准 美国病理学会（CAP）1976年提出了实验用水的三级标准 美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）于1985年提出了新标准 中华人民共和国国家标准委员会--- GB/T6682-2008 分析实验室用水国家标准 分析实验室用水的原水应为饮用水或适当纯度的水。 分析实验室用水共分为三个级别：一级水、二级水和三级水。

CAP:美国病理学家学会

NCCLS:美国临床实验室标准化委员会

实验室用水标准 ☆三级水 是最低级别的实验室级纯水，推荐用于玻璃器皿洗涤；水浴、高压灭菌锅用水以及超纯水系统的进水。 ☆二级水 一般用于常规实验室应用，不仅要求离子指标上有较高的纯度，而且要求有机物和微生物的含量低。比如及微生物培养基的制备；为超纯水系统、临床生化分析仪、也可为化学分析或合成制备试剂。 ☆一级水 往往用于严格的实验应用，水中导电的介质全部除去，又将水中不解离的胶体物质，气体及有机物均除去至很低程度的水。这种水中几乎没有杂质，更没有细菌病毒微量元素。如HPLC 流动相制备；GC 空白样制备和样品稀释、及试管婴儿；分子生物学试剂制备(DNA 测序、PCR 扩增等)等。

实验用纯水的制备方法 1.炭吸附法 　　除去有机物质 2.超滤膜法 　　除去悬浮物 3.电渗透法 　 104-105Ω／cm 4.蒸馏法 　 25℃时电阻率为 1 × 105Ω/cm左右 5.离子交换法 25℃时电阻率为 5 × 106Ω/cm左右 6.混合纯化系统 用滤膜预处理系统的供水、结合炭吸附法、离子交换处理法等，最后以0.45μm的滤膜去除微生物，此方法可获得二级甚至一级纯水。

炭吸附法 优点:1.设备简单，操作方便。2.它具有物理吸附和化学吸附的双重特性,可以有选择的吸附气相、液相中的各种有机物质。 缺点:纯水制备效率低.,仅作为各种制备纯水配套的一种措施。 　　活性炭是优良的吸附剂。

电渗透法 在电场作用下水中各种阳离子趋向阴极，各种阴离子趋向阳极．但阳离子只能透过阳膜而被相邻的阴膜所阻，阴离子与此相反．这样，在一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成含盐多的浓水，在另一些隔间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成淡水。

电渗透法优点与缺点 优点: 1.不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。2.对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济。 缺点: 消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗析也不经济。 纯度:25℃时104～105Ω/cm

超滤膜法 特点:仅能除去胶体细菌等大分子物质和悬浮物,所得水还需进一步纯化。也是作为各种制备纯水配套的一种措施。

蒸馏法 蒸馏水制备 优点:设备简单 缺点: 1.挥发性物质难以去除；2.耗能大，耗水多； 3.需注意管道清洁。 纯度： 25℃时1×105Ω/cm

离子交换法 氢氧型强碱性 阴离子交换树脂(R′—NOH，R′为母体)，其中的OH-与水中的CL-、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们除去： 氢型强酸性 阳离子交换树脂 (R—SO3H，R为母体) ，其中的H+与Ca2+、Na+等金属离子发生交换反应，而将钙、镁离子除去 氢氧型强碱性 阴离子交换树脂(R′—NOH，R′为母体)，其中的OH-与水中的CL-、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们除去：

离子交换法优点与缺点 优点: 除了可去除杂质离子以外兼具吸附电中性杂质和过滤颗粒杂质的作用。 缺点: 1.设备较复杂，成本较高；2.由于离于交换为可逆反应，故去离子水并非绝对不含离子 。 纯度：25℃时5×106Ω/cm

混合纯化水系统 实验室纯水系统 医用超纯水设备 橱下式全自动逆渗透纯水机 特点:多种方法混合纯化,可获得纯度很高的二级甚至一级纯水。

蒸馏水、双蒸水、重蒸水、离子交换水、去离子水？ 电导：西门子（s） 电导率： s·cm-1 电阻：Ω 电阻率：Ω·cm 水的纯度检查 单位： 用电导仪或兆欧表测定其电导率或电阻率 用特定试剂检测水中残留的Ca2+、Mg2+、CI-、SO42- 、硅酸盐等成分的含量 微生物含量检测 蒸馏水、双蒸水、重蒸水、离子交换水、去离子水？

水在贮存 各级水在贮存期间，其沾污的主要来源是容器可溶成分的溶解、空气中的二氧化碳和其它杂质。 一级水不可贮存，使用前制备。 二级水、三级水可适量制备，分别贮存在预先经同级水清洗过的相应容器中。 各级用水均使用密闭的、专用聚乙烯容器。三级水也可使用密闭、专用的玻璃容器。

试剂盒 商品试剂与标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒，或叫试剂组合。

试剂盒的种类 临床生化试剂盒：液体单试剂 液体双试剂 干粉试剂 干片试剂

试剂盒的种类 1.液体型试剂 (1)液体单试剂 液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂混合在一起组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用适当的方法检测结果。 (2)液体双试剂 液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按用途科学地分成两类，分别配成两种试剂。通常加入第一试剂后可全部或部分消除某些内源性干扰，第二试剂则启动被检测反应，两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。

双试剂型试剂盒

Trinder反应 葡萄糖+O2+2H2O 葡萄糖酸+ 2H2O2 2H2O2 +4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物

试剂盒的种类 2.干粉（片）型试剂 由厂家配制完成后冻干，再用球磨技术粉碎成粉或压片而成，使用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。 干粉（片）试剂存在的问题： ①要使试剂各组分混合得非常均匀，技术难度很大； ②分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差； ③水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有很大的影响。如水中F会引起某些酶失活；水中的重金属离子会影响酶活力；水中某些微生物会引起酶失活；水中含有NH4会影响尿素氮测定的准确度。

液体双试剂盒的特点 液体双试剂具有液体试剂和双试剂的优点。 1.提高了抗干扰反应的能力 在临床生化测定过程中，血标本除了含有待测物质外，还含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都会干扰或参与测试反应，引起非特异性反应干扰，而双试剂型试剂盒设计的一个主要目的就是为了克服这种干扰反应。 在测定过程中，首先让试剂Ⅰ与标本中的干扰物质反应，反应后再用试剂Ⅱ启动真正的测试反应，从而使测定结果更加准确。

液体双试剂盒的特点 2.稳定性能优良 全液体酶法试剂从分配上解决了干粉、片剂型复溶后稳定性的影响：①用户可根据每次标本量多少按一定比例配制适量工作液，当天配制当天用完，这样便可减少试剂损失。②如果用户使用的自动生化分析仪有双试剂测定功能，那么，就不必把双试剂混合成工作试剂进行测定，试剂的有效期一年便是工作液的有效期。 3.试剂组分高度均一

试剂盒的性能指标 1.准确性 一般用重复测定定值质控血清和回收试验进行考察。重复测定的结果应在±2s之内，回收率应在100±5 % 之内。 2.精密度 一般采用批内变异系数的指标来考察。要求最佳条件下批内变异系数：CV＜ 5%。 3.线性及线性范围 可采用线性拟合实验方法评价。线性范围变窄则不可使用。 4. 空白吸光度 该项指标主要考查试剂盒中杂质污染情况。国家临床检验中心对试剂空白有要求，不符合要求说明试剂杂质过多或被污染，不能使用。

试剂盒的选购 选购试剂盒时一般应考虑以下原则： 1.方法特异性好、灵敏度高、准确度和精密度质量标准。 2.对试剂盒的包装、理学性能、方法学性能充分了解，确认性能参数符合试剂说明书承诺和本实验室的要求。 3.国家食品与药品监督管理局(CFDA)的批准文号。 4.配套使用的校准品，校准物质符合标准和要求，最好能提供溯源性的材料和说明。 5.试剂盒的有效期至少一年。 6.试剂对环境的污染小，对工作人员无明显毒害作用，无强烈腐蚀性。

试剂盒的使用 试剂盒在使用前和使用过程中应关注以下内容： 1.查阅说明书 2.理学检查 3.稳定性 4.均一性 5.性能评价

课后作业： 1、何谓双蒸馏水、交换水？实验室用水分为几级？如何按照GB/T6682-2008选择生化实验用水？ 2、如何选择生化分析试剂盒？

END 谢 谢