医学微生物学 实验五
实验五 其他细菌、真菌、病毒学试验
主要内容： 1、上次试验结果观察 2、厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法 3、螺旋体形态观察 4、真菌的形态与培养 5、病毒学试验 6、分枝杆菌与抗酸染色
一、上次试验结果观察 1、双糖铁基培养基结果观察 乳糖 H2S 葡萄糖 动力 伤寒杆菌 — — + + 痢疾杆菌 — — + — 伤寒杆菌 — — + + 痢疾杆菌 — — + — 大肠杆菌 + — ⊕ +
2、血清学试验（示教） 选取沙门氏菌或痢疾杆菌属的诊断血清，与双糖铁基斜面上的菌苔作玻片凝集反应。
二、厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法 1、形态观察 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌
破伤风梭菌
破伤风梭菌（芽胞）
破伤风梭菌（鞭毛）
产气荚膜梭菌
2、厌氧培养法 用于专性厌氧菌的培养 方法： 1)将普通培养基置于无氧环境中培养 如:焦性没食子酸法 2)厌氧培养基:在培养基中加氧化还原剂 如:庖肉培养基
（1）焦性没食子酸法 a. 原理：焦性没食子酸在碱性溶液中能迅速吸收氧气，生成深棕色焦性没食子橙，利用此法可除去试管或平皿等容器中的氧气。
焦性没食子酸培养基
血平板 石蜡 纱布 焦性没食子酸培养基示意图
b.培养结果观察 产气荚膜梭菌血平板厌氧培养
（2）疱肉培养基 a.原理 动物组织耗氧法 ① 不饱和脂肪酸 ② 还原型氨基酸 —— 谷胱甘肽 ③ 凡士林
破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 正常对照
三、螺旋体 1、形态特点： 原核细胞型微生物 菌体细长柔软，弯曲呈螺旋状， 运动活泼 2、分类： 根据抗原性、螺旋的数目、大 小、规则程度、螺旋间距分类。
与疾病有关的： 疏螺旋体属 如 伯氏疏螺旋体 密螺旋体属 如 梅毒螺旋体 钩端螺旋体属 如 钩端螺旋体
回归热疏螺旋体
梅毒螺旋体
钩端螺旋体
钩端螺旋体
钩端螺旋体（镀银染色）
3、暗视野显微镜 普通光学显微镜上安装一个特制的集光器—暗视野集光器，其中央为不透光的黑板，视野背景是暗的，标本上的光线弥散反射
四、真菌的形态与培养 1、形态: 单细胞—酵母菌 如白色念 珠菌 新型隐球菌 多细胞—丝状菌
白色念珠菌
白色念珠菌
新型隐球菌（墨汁染色）
2、培养特性: 沙保培养基 成份： 蛋白胨 1g 琼脂 2g 葡萄糖 4g 蒸馏水 100ml pH 4—5左右
菌落特征: 酵母型菌落 酵母样菌落 丝状菌落 新型隐球菌 单细胞 白色念珠菌 多细胞
酵母样菌落 酵母型菌落
酵母型菌落 酵母样菌落
五、病毒学试验 1、病毒包涵体形态 2、病毒感染的细胞病变（录像）
什么是包涵体？ 病毒感染细胞后，在胞浆或胞核内出现嗜酸或嗜碱性的圆形、椭圆形、不规则形斑块结构。
狂犬病病毒包涵体（内基小体）
巨细胞病毒包涵体
六、分枝杆菌与抗酸染色 1、 形态 2、结构特点 3、抗酸染色
结核杆菌（抗酸染色）
结核杆菌（抗酸染色）
2、结构特点： 细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸 ，一般不易着色，如果经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，所以又称抗酸杆菌。
3、抗酸染色 （1）温染：石炭酸复红溶液 5 min （2）脱色：3%盐酸酒精溶液 0.5-1 min