蛋白定量 Bradford BCA UV light 三強鼎立,誰與爭鋒 上映日期: 西元 2010 12月 3日 吉時 導演: 李惟宇.

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蛋白定量 Bradford BCA UV light 三強鼎立,誰與爭鋒 上映日期: 西元 2010 12月 3日 吉時 導演: 李惟宇

Bradford assay Van der Waals forces 謀略: 見縫插針 武器 破綻: 謀略: 陰陽調合 positive charges Basic buffer conditions Detergents (SDS ……)

BCA assay 遙想公瑾當年…… Protein + Cu2+ Protein-Cu2+ complex (biuret reaction) Protein-Cu2+ Cu1+ + protein oxidation product OH- Aromatic amino acid

錦囊妙計: 氧化還原反應 Cysteine 破綻: 還原劑 Mercaptoethanol (2-ME)

UV Spectrophotometric assay 戰鬥力 OD275, OD280 比爾定律: Lambert-Beer law 破綻: OD280 吸光的物質

別亂插!

十萬個為什麼! 破壞的 SDS=界面活性劑=清潔劑=無止境的泡泡 R2, 怎麼那麼小? Loading 的量不同, 可以比較嗎? 雪特! 哪來的泡泡? 破壞的 團結就是 力量 無奸不成師 SDS=界面活性劑=清潔劑=無止境的泡泡

UV Spectrophotometric assay BCA assay E0 E1 E2 E3 E4 0.2% 1 % SDS 1 5 16 mM 2-ME 10 BSA S1 3 H2O 17 11 2 15 1mM 6 Reagent 加入後,離心,交給助教 30 min.,loading,等待結果 UV Spectrophotometric assay 三倍稀釋未知濃度蛋白(U) 專人伴你上機(問題補充到結報) 藉由標準曲線回歸濃度(紀錄本上) mg/ml OD280 0.375 0.29 0.75 0.568 1.5 1.159

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