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一、目的 （ 1 ）掌握促黄体素释放素类似物（ LRH-A ）和人绒毛膜促性腺激素（ HCG ） 引起蛙排精的机理； （ 2 ）掌握垂体中与体色有关的褪黑激素的生理作用； （ 3 ）学习口腔内摘除脑垂体的方法。 二、原理 （ 1 ） LRH-A 和 HCG 经体内注射后都可引起蛙（或蟾蜍）排精，两者的作用 机理不同。 HCG 可直接作用于精巢引起排精， LRH-A 须通过垂体释放 GTH ， 从而间接引起排精； （ 2 ）腺垂体分泌促黑激素，故去除垂体将导致蛙体色变淡。 实验八 腺垂体激素对蛙体色和生殖的影响
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三、材料和器材： 每组用成熟雄蛙 4 只、 LRH-A 、 HCG ； 2ml 注射器、细玻璃滴 管、小烧杯、 0.65 ％生理盐水或任氏液；常规手术器械一套； 蛙板、纱布、大头针、图订、纱布、布条、光学显微镜、载玻 片。
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四、方法和步骤 1 、每组选择 4 只颜色相似的成体雄蛙； 2 、预检精子的有无； 用滴管插入泄殖腔，管口先向下，再稍向上，即可插入， 深度 0.5 ～ 1cm ，然后轻轻前后移动吸取尿液，滴一滴于载波 片上，用低倍显微镜检查是否有精子存在，尿液中无精子的 雄蛙方可用于本实验，并编号。 注：如泄殖腔中无尿液，可先用滴管注入少量生理盐水或 任氏液后再吸。
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3 、催产药物注射； 取两只经预检无精子的蛙，其中一只从背部皮下注入 HCG 200 ～ 300 国际单位，另一只注射 LRH-A 10 ～ 20μg 。 注射后的蛙，置于室温下 1.5 ～ 2 小时后，用与预检相同的 方法吸出尿液在低倍显微镜下检查是否发现精子。 注：蛙精子头部棒状，头尖，有一鞭毛状细尾。初吸 出的精子具前进运动或左右摆动，稍过些时间不活动。
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4 、取经预检正常的蛙两只，摘除垂体； 左手打开蛙口腔，右手用剪刀（或解剖刀）沿中线剪 （切）开上颚粘膜，剪开（切口）部位在眼球稍下方的左、 右耳咽管孔连线的中央处。
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将粘膜向两侧拉开，暴露头骨，可见副蝶骨形如短剑状， 剑尖指向蛙前方，剑柄在后方。小心地用剪刀尖和镊子将副 蝶骨除去，直径约 3mm ，垂体就埋藏在副蝶骨的剑尖与剑柄 交界处，通过缺口，可看到位于视交叉下一粉红色扁圆形体 即为垂体，其一部分被漏斗所遮盖，用针挑开硬膜，用小镊 子将垂体夹出，由于脑内压较高，有时垂体被自动挤出。伤 口不必缝合，若有出血，则应止血。
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5 、 将摘除垂体的蛙，一只注射 HCG ，另一只注射 LRH-A ， 剂量同前； 6 、 1.5 ～ 2 小时后，取蛙尿液镜检。 与前面不摘除垂体的实验结果作以下两点比较：是否有精 子出现？注意观察皮肤颜色有何变化？为什么？
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注意事项： （ 1 ）成年蛙雌雄的挑选：雄蛙体小，雌蛙体较大；雄蛙下颌 外两侧有外鸣囊，其颜色较暗，雌蛙无外鸣囊，不会叫；雄 蛙在生殖季节，前肢拇指基部内侧具婚瘤，雌蛙无婚瘤。 （ 2 ）取尿液用的滴管管口应光滑，以免损伤组织。 （ 3 ）泄殖腔内有原生动物，观察时应与精子区别。 （ 4 ）做好标记及记录时间（组别、药物）。
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