实验四 植物细胞微丝束的观察 一、实验目的 掌握考马斯亮蓝R250染植物细胞内微丝束的方法。
二、实验原理 真核细胞胞质中错综复杂的纤维网络称为细胞质骨架，按纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微丝、微管和中间纤维。微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维，在细胞中它们又与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构，如应力纤维（又称微丝束）。本实验利用考马斯亮蓝R250染色法来观察植物细胞中由微丝组成的微丝束。考马斯亮蓝R250是一种蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，并非特异地显示微丝，但由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，如微管；还有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是由微丝平行排列组成的微丝束。
三、实验用品 1、实验材料 2、实验试剂 3、器材 洋葱鳞茎 （1） M-缓冲液：咪唑50mmol/l, KCL 50mmol/l, MgCL20.5 mmol/l, EGTA 1mmol/l, EDTA 0.1mmol/l, 巯基乙醇1mmol/l, 甘油4 mmol/l, 用1mol/l HCL调pH7.2。 （2）磷酸缓冲液 （3）1% Triton X-100/ M-缓冲液 （4）0.2%考马斯亮蓝R250 染液： 0.2g考马斯亮蓝R250溶于甲醇46.5ml, 冰醋酸7ml, 蒸馏水46.5ml。 3、器材 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿
四、实验步骤 1、取洋葱鳞茎内表皮（大小约1cm2），置于盛有磷酸缓冲液（pH6.8）的培养皿中。 2、吸去缓冲液，用Triton X-100处理20min。 3、除去Triton X-100，用M-缓冲液漂洗2次，每次10min。 4、3%戊二醛固定液中固定20-30min。 5、在磷酸缓冲液中洗三次，每次3min。 6、0.2%考马斯亮蓝R250染色15-20min。 7、小心地用水漂洗数次，将样品置于载玻片上，盖好盖玻片，在显微镜下观察。
五、作业 描绘你所观察到的植物细胞中微丝平行排列 组成的微丝束的图像。 六、思考题 实验中试剂Triton X-100的作用是什么？