发光乙肝五项定量检测意义

主要内容 一、乙肝病毒病原学、流行病学及常见检测指标 二、乙肝五项定量检测意义 三、乙肝五项常见检测模式解释

一、乙肝病毒的病原学 及流行病学及常见检测指标 1.1 乙肝病毒的流行现状； 1.2 乙肝病毒的形态和结构； 1.3 乙肝的传播途径和高危人群；

1.1 乙肝病毒的流行现状 1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况 1.1.2我国HBV感染流行现状 1.1.3乙肝亚型的地理分布

1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行现状

1.1.2我国HBV感染流行现状 我国是HBV感染的高流行区。 我国HBV感染率概况为： 抗HBc及／或抗HBs阳性：60％ 非感染人群：26％ 慢性乙型肝炎：2％ 表面抗原阳性的慢性无症状HBV携带者：10％ 表面抗原阴性的慢性无症状HBV携带者：2％ 资料来源：骆抗先，《乙型肝炎基础和临床》第二版

1.1.3乙肝亚型的地理分布 ayw多见于非洲、东地中海、中东及巴基斯坦； adw多见于北欧及美洲；adr多见于东南亚及远东，adw及adr多见于印尼、马来西亚、新几内亚及泰国 我国则具有一定的民族性，汉族人以adr为主，adw次之 蒙古族、维吾尔族、回族等兄弟民族几乎都是ayw亚型，ayr亚型极其少见，而adr亚型几乎没有。

1.2 乙肝病毒的形态和结构 1.2.1 HBV的基本（电镜）结构 1.2.2 HBV的基因结构

1.2.1HBV形态结构 大球形颗粒（Dane颗粒） 小球形颗粒 管形颗粒

Dane颗粒的基本结构示意图 HBsAg HBcAg HBV DNA DNAP （外膜蛋白） （核衣壳蛋白） 一份大三阳结果分析，1ml血液中含108个病毒颗粒，1010个管型颗粒和1013个小球性颗粒 DNAP

Dane颗粒的基本结构示意图

1.2.2 HBV基因结构 pre-S1 pre-S1蛋白 pre-S2 pre-S2蛋白 S HBsAg pre-C HBeAg C HBcAg P DNAP X HBxAg P HBV DNA 3.2 kb C HBsAg pre-c X pre-S2 pre-S1

（伤口、共用刀具、消化道粘膜破损或溃疡等） 1.3传播途径及高危人群 1.3.1乙肝病毒的传播途径 血液传播、 （输血、血制品、 医疗器械等） 母婴 传播 日常生活 （伤口、共用刀具、消化道粘膜破损或溃疡等） 性传播

1.3.2高危人群 母亲是HBV感染者的婴儿 乙肝患者的家庭成员 吸毒者 监狱犯人 性传播疾病病人 血液透析病人 医护人员

1.4疾病诊断的临床意义及常见模式分析 1.4.1 HBV血清标志物及其临床意义 1.4.2 介绍几个临床乙肝检测的概念 1.4.3 临床常见乙肝血清标志物反映模式

1.4.1 HBV血清标志物及其临床意义 肝组织病理学检查 肝功能(主要为丙氨酸氨基转移酶(ALT) 乙肝病毒感染标志物 ※ HBV-DNA ※两对半: 抗原 抗体 外膜 ——————HBsAg HBsAb 核壳分泌蛋白—— HBeAg HBeAb 核壳结构蛋白——HBcAg HBcAb 肝组织病理学检查

ALT的意义 谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、坏死时，ALT就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT升高，因此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。 但是除了病毒性肝炎外，其它类型的肝炎或肝脏疾病，ALT也会升高。

HBV-DNA的意义 DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的遗传物质，当HBV侵入肝细胞后，就会以HBV-DNA为模板，合成新的HBV颗粒并释放入血，故HBV-DNA是病毒复制的一个重要指标。

肝组织病理学检查 肝组织病理学检查是“金标准”： 明确诊断 衡量肝脏炎症活动度 衡量纤维化程度 决定治疗方案，预测药物疗效 对肝病而言 肝组织学检查是比血清ALT 更灵敏而精确的指标

乙肝病毒感染血清标志物 抗原 抗体（机体产生） 外膜 HBsAg HBsAb 核壳分泌蛋白 HBeAg HBeAb 抗原 抗体（机体产生） 外膜 HBsAg HBsAb 核壳分泌蛋白 HBeAg HBeAb 核壳结构蛋白 HBcAg HBcAb DNA HBV-DNA

（1）HBsAg ●出现时间：HBV感染后2～6个月（潜伏期） ●持续时间： 曾用名：HA、澳抗 急性自限性肝炎：6个月内可消失

●HBsAg 有抗原性而无传染性 ●HBsAg 的亚型 adr 长江以北 adw 长江以南 ayr 新疆、西藏、内蒙等 ayw HBsAg HBV 整合 S 基因 肝细胞 DNA “空心汤团” 持续表达 adr ●HBsAg 的亚型 长江以北 adw 长江以南 ayr 新疆、西藏、内蒙等 ayw

（2）抗-HBs ●出现时间：急性感染后期、HBsAg 消失后和注射疫苗后正常的免疫应答者 ●抗-HBs为保护性抗体（中和抗体） 其出现标志着HBV感染进入恢复期和注射乙肝疫苗后产生正常的免疫应答 ●抗-HBs 对相同 HBsAg亚型的HBV再感染有免 疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。

（3）HBeAg HBeAg是HBcAg的降解产物 HBcAg HBeAg HBV C基因 C 区 前C区 表 达 前C / C 蛋白 切割、加工 HBeAg HBcAg 分泌到细胞外 HBeAg只存在于血清中

●HBeAg是病毒复制和传染性的标志 血清HBeAg与HBV DNA的含量成正相关，符合率达到95%以上。

（4）抗-HBe ●出现时间：随着HBeAg的消失而出现 ●抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低 抗-HBe阳性者中，16.3%～30%左右HBV DNA 仍阳性 可能与前C基因变异有关 易加重病情、易演变为肝硬化 α-干扰素疗效亦较差

（5）抗-HBc ●HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒 核心中，到血液中即被降解为HBeAg。 一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc 持续时间：6～18个月 抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志 抗HBc-IgG：凡“有过” HBV感染者均可阳性 HBcAg的免疫原性最强 可终身阳性

常规检测的HBV血清标志物的基本解释 HBsAg HBV感染，但未必是急性肝炎或者 慢性病变活动的病原。 抗HBs 感染后免疫；对疫苗的免疫应答；或HBIG的被动免疫 HBeAg 反映HBV复制，有病毒血症，血液高传染性 抗HBe ALT持续正常者表示HBV低复制或不复制， HBsAg (+)血液低传染性。 ALT波动者表示病毒变异。 抗HBc 低滴度表示过去感染；高滴度表示现行感染。 IgM抗HBc 高滴度表示急性或近期感染； 活动性病变可出现低滴度。 来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版

1.4.2介绍几个概念： ① “两对半” HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb ③ “转 阴” 常用指标：血清HBeAg抗原—抗体转换率 HBV DNA 阴转率

二、乙肝五项定量检测的应用 急性乙肝治疗中的具体监测 慢性无症状携带者（AsC）的动态观察 酶免或胶体金检测HBsAg（-）的HBV感染的结果分析 注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs浓度的定量分析） 结合FQ-PCR-DNA诊断病情

HBV DNA HBcAb HBsAg HBeAg HBeAb HBsAb

化学发光定量（CLIA）检测HBsAg灵敏度可达0. 05-0. 1ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0. 5-1 化学发光定量（CLIA）检测HBsAg灵敏度可达0.05-0.1ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0.5-1.0ng/ml，胶体金（POCT）检测HBsAg灵敏度是1-5ng/ml也就是说只有血清中的HBsAg达到0.5-5ng/ml酶标或胶体金才会呈阳性反应。 ■急性乙肝早期：CLIA定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与preS1同时检测，在病程观察中大大缩短“窗口期”时间，而酶标或胶体金在乙肝早期检测往往HBsAg呈阴性。 ■慢性乙肝：一些患者由于机体对HBV包膜蛋白(HBsAg)表达较低，酶标或胶体金检测可出现HBsAg和抗-HBs均阴性的情况，而CLIA技术则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据 。 ■病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA或胶体金测不出抗原，而CLIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能同时检测出HBsAg和抗-HBs。

注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs浓度的定量分析）： （1）无应答者：抗体浓度小于1mIU/ml，无抗体产生或非特异性结合反应，约占接种者的5%，继续加大剂量或更换疫苗厂家全程（3针）免疫注射； （2）低应答者：抗体浓度为1-10mIU/ml，保护作用比较弱，约占接种者的10%，须加强两针疫苗注射； （3）中应答者：抗体浓度为10-100mIU/ml，已有一定的保护力，约占接种者65%，须加强一针疫苗注射； （4）高应答者：抗体浓度大于100mIU/mI，免疫效果最好，约占接种者20%，不需要加强注射。 因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。

FQ-PCR-DNA与HBeAg定量检测相关性分析 1、反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 2、PCR反应条件为温度、时间和循环次数（变性温度与时间为93℃～94℃lmin ；退火与延伸(复性)温度与时间 ； 55℃ 2min； 循环次数：40次 3、PCR反应步骤：变性，退火和延伸 4、假阳性和假阴性 5、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态 6、不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态 结合PCR诊断病情 HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标定量变化更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均还较高，提示并未完全痊愈，有可能病毒再次出现复制状况，尚须密切关注。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均很低或阴性并持续一段时间，提示可能完全痊愈，预后疗效良好。

（1）定量分析HBsAg和抗-HBs的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg浓度降低，抗-HBs的浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展。反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而抗-HBs一直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或乙肝病毒携带者。在急性HBV恢复期中约有3%的个例可同时检出低水平HBsAg和抗-HBs，然后HBsAg消失而抗-HBs水平渐增高。

（2）定量分析HBeAg和抗-HBe的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向抗-HBe转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和抗-HBe浓度升高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的抗-HBe一方面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关，应进一步结合肝功生化指标如ALT、AST、BIL等进行综合判定。

（3）抗-HBc浓度的高低可以反映病毒感染的状态。高浓度的抗-HBc提示乙肝急性或现行感染，常与HBsAg并存，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-HBc持续高浓度。而低浓度的抗-HBc一般为恢复期或既往感染，常于抗-HBs并存，无肝损害或肝损害早已静息。

（4）急性乙肝一般会在六个内病情缓解，甚至自愈。病情超过六个月仍未缓解者，多转为慢性化，但通过五项联合定量分析，再结合肝功指标和HBV DNA的水平，即若表现为HBeAg下降、抗-HBe出现或渐升，HBsAg和HBV DNA血清水平降低，这是病变恢复的时相，可望在1-2年病毒被清除而疾病痊愈；若HBeAg和HBV DNA 血清水平持续很高的病人，预期可能保留慢性无症状携带（AsC）或慢性乙型肝炎。

三.乙肝检测模式的解释 3.1常见九种模式 3.2少见十六种模式 3.3罕见七种模式 乙肝五项定量检测模式解释.doc

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