实验二十七 磷、胆红素测定
一、实验原理: P:磷在酸性条件,钼酸铵与蛋白反应形成非还原性磷钼酸化合物,在340nm测量吸光度,吸光度增加与血清无机磷成正比,与同样处理的标准品比较,可求得样本中无机磷的含量。
总胆红素(T.Bili): 对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2 氯化重氮苯磺酸+NaCL TBIL+氯化重氮苯磺酸 催速剂 偶氮胆红素 直接胆红素(D.Bili) : DBIL+氯化重氮苯磺酸 偶氮胆红素
二、实验试剂: P: R1:钼酸胺、硫酸 R2:吐温-80 磷标准液:1.29mmol/L 取13mlR1与0.5mlR2混合均匀,为工作液
总胆红素: R1:对氨基苯磺酸、盐酸 R2:亚硝酸钠 总胆红素标准液:36μmol/L R1:R2=5:1 即为工作液 标准液用2ml蒸馏水复溶后可直接使用
直接胆红素: R1:EDTA、盐酸、对氨基苯磺酸 R2:亚硝酸钠 直接胆红素标准液:21.8μmol/L R1:R2=40:1 即为工作液 标准液用2ml蒸馏水复溶后可直接使用
三、实验操作: P: 空白 标准 测定 蒸馏水 25μl 标准液 25μl 血清 25μl 试剂 1ml 1ml 1ml 混匀37℃,水浴10min、半自动生化分析仪12。
T.Bili: 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2ml 工作液 2ml 2ml 2ml 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2ml 工作液 2ml 2ml 2ml 生理盐水 0.1ml 0.1ml 标准液 0.1ml 0.1ml 样品 0.1ml 0.1ml 混匀20-25℃, 10min、546nm比色
D.Bili: 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2m 工作液 2ml 2ml 2ml 试剂空白 试剂 标准空白 标准 样品空白 样品 R1 2ml 2ml 2m 工作液 2ml 2ml 2ml 生理盐水 0.08ml 0.08ml 标准液 0.08ml 0.08ml 样品 0.08ml 0.08ml 混匀37℃, 5min、546nm比色
四、计算: 磷浓度=A样品/A标准×C标准 胆红素浓度=[(A样品-A样品空白)- (A试剂-A试剂空白)]×F F=C标准/[(A标准-A标准空白)- (A试剂-A试剂空白)]
五.参考值: P:0.9-1.34mmol/L T.Bili :5.1-19μ mol/L D.Bili :0-5.1μ mol/L
六、注意事项: 1、测定器具(比色杯)必须用蒸馏水清洗,以免污染。 2、因胆红素遇光分解为胆绿素,因此采血后,应立即测定。 3、磷试剂内有强酸,切勿接触皮肤,不慎接触,立即水冲洗。