实验七 粪便标本的病原学检查（1） 目的要求： 1.掌握粪便标本病原学检查的步骤、方法、结果判断及实际意义。 2．熟悉肠道感染细菌的种类及生物学特点。 3．熟悉Widal反应的原理、试剂、方法、结果判断 及意义。 4．了解肠道感染细菌的微生物学检查原则

1．观察上次甘露醇分解试验结果，完成脓汁标本病原学检查综合实验报告。 2．示教内容 粪便标本的病原学检查（1） 实验内容： 1．观察上次甘露醇分解试验结果，完成脓汁标本病原学检查综合实验报告。 2．示教内容 （1）观察主要肠道感染细菌形态示教片（大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌） （2）介绍常用肠道细菌分离培养基（EMB平板、SS平板） （3）常见厌氧菌的形态和培养特性

血平板分离培养结果 透明溶血环 金葡或乙链 挑取菌落 金黄色色素 排除乙链 初步判断脓汁标本中可能为金葡，故做以下试验： 1）血浆凝固酶试验 见凝固颗粒 说明标本中的细菌可产生血浆凝固酶 进一步判断脓汁标本中病原性球菌为金葡。 2）甘露醇发酵试验 结果为黄色 原因？？？ 甘露醇发酵试验为阳性 更进一步判断，脓汁标本中病原性球菌为金葡。 结论：根据…试验，这份脓汁标本中病原性球菌为金葡。

（4）你如何进行病原学诊断并为未来的诊断结果提供可行的治疗方案？ 要求:按顺序回答上述问题,要条理清楚,层次分明,结论准确. 病例简介 患者，25岁，青年男性，建筑工人。入院前1周搬运建筑材料时颈部软组织皮肤被擦伤，有一长约5厘米的开放性伤口。门诊医生进行了简单的清创缝合处理，并给与青霉素注射液320万单位/日,静脉滴注.3天前开始发热，门诊查体温达39℃, 患者呈急性重病容,面色苍白，局部伤口化脓，有脓性渗出物。肝脾肿大.急诊入住新医大第一附属医院创伤外科诊治。实验室检查：外周血白细胞总数明显升高，分类计数中性粒细胞升高。红细胞总数略低于正常，血红蛋白低于正常。伤口局部渗出物涂片染色镜检可见满视野白细胞和革兰阳性球菌。 问题： （1）你认为该患者最可能感染什么病原菌？ （2）你的初步诊断是什么？ （3）为什么用青霉素治疗无效？ （4）你如何进行病原学诊断并为未来的诊断结果提供可行的治疗方案？ 要求:按顺序回答上述问题,要条理清楚,层次分明,结论准确.

霍乱弧菌（革兰染色）

产气荚膜梭菌

肉毒梭菌（c. botulinum）

发酵乳糖菌落 大肠杆菌 不发酵乳糖菌落 肠道致病菌 SS培养基 麦糠凯培养基 挑选可疑菌落进行下一步生化反应鉴定

Growth of anaerobic bacterium

产气荚膜梭菌培养特性

3．操作内容：粪便标本的病原学检查（1） 材料： SS琼脂平板培养基 粪便标本棉试子 接种环 酒精灯等 方法：分离培养--分区划线

1．观察SS平板分离培养结果，并记录实验结果。 2．示教内容 粪便标本的病原学检查（2） 实验内容 1．观察SS平板分离培养结果，并记录实验结果。 2．示教内容 （1）观察大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、和痢疾杆菌生化反应试验示教（糖发酵试验） （2）介绍KIA培养基 （3）观察布鲁菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌和 绿脓杆菌的形态

Citrate Utilization test Indole test Methyl red test Citrate Utilization test VP test

硫化氢试验 有些细菌如沙门菌、变形杆菌等能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子生成黑色的硫化物 +（FeS黑色）

细菌 双糖铁培养基( KIA) H2S产生 上层 下层 乳糖 颜色 葡萄糖 动力 大肠杆菌 － + 黄色 痢疾杆菌 红色 伤寒杆菌 +/－ 肖氏沙门菌 ++

大肠杆菌在双糖铁培养基中表现： 记录： 上黄下黄 葡萄糖 + 乳糖 + 动力 + H2S — KIA（克氏双糖管）：上黄下黄 大肠杆菌 葡萄糖 + 乳糖 + 动力 + H2S — KIA（克氏双糖管）：上黄下黄 未接种管 大肠杆菌 生长管

痢疾杆菌在双糖铁培养基中表现： 记录： 无动力为要点！ 无动力为要点！ 无动力为要点 无动力为要点！ 葡萄糖 + 乳糖 — 动力 — 葡萄糖 + 乳糖 — 动力 — H2S — 无动力为要点！ 无动力为要点！ 无动力为要点 无动力为要点！ 大肠杆菌 生长管 痢疾杆菌 生长管 未接种管

生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、甘露糖。 不分解乳糖，不产酸。 KIA（克氏双糖管）上红下黄/黑 H2S(-/+) 动力(+)

动力 + 动力- 动力+

血清学检查（肥达试验，widal test） 单位：ml 　　　　1 2 3 4 5 6 7 8 生理盐水 0. 9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 患者血清 0. 1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.5 诊断菌液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 从后往前加 血清稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 对照 振摇室温24小时 结果 ++++ +++ ++ ++ ++ + - -

（四）微生物学检查法 伤寒沙门菌 O凝集效价为1：80 H凝集效价为1：160 副伤寒沙门菌H凝集效价为1：80 肥达试验结果解释及注意事项： 正常人抗体水平 伤寒沙门菌 O凝集效价为1：80 　　　　　 H凝集效价为1：160 副伤寒沙门菌H凝集效价为1：80

若O、H凝集效价均超过正常值，则可能感染了伤 寒、副 伤寒； 若两者皆低，则患伤寒可能性很小； 若O不高，H高则可能是预防接种或非特异回忆反 应 若O高，H不高，有可能是感染早期或感染了与伤 寒沙门菌有交叉反应的其他沙门菌。

3．操作内容：(1)粪便标本的病原学检查（2） 材料： SS平板分离培养物 KIA（克氏双糖铁）斜面培养基 接种针 酒精灯 方法：挑取SS平板分离培养基上的可疑菌落 接种KIA斜面，进行纯培养和生化反应鉴定。 KIA斜面培养基

白喉棒状杆菌（不同染色下观察）

鼠疫耶尔森菌（美兰染色） 炭疽芽胞杆菌