微生物实验F 外界因素对细菌的影响 常见病原性球菌检查程序
外界因素对细菌的影响 高压蒸汽灭菌法 紫外线的杀菌作用 化学、生物因素对细菌的影响
1.高压蒸汽灭菌法(介绍) 菌体蛋白遇热变性凝固 121℃ 20min 压力表 排气阀 安全阀 锅内温度变化曲线 排气管 金属容器 水、电阻丝 金属容器 排气管 排气阀 压力表 安全阀 锅内温度变化曲线
2.紫外线杀菌实验 (以小组为单位) 棉签涂菌方法 牛皮纸 皿盖 紫外线照射30min 盖盖,37℃培养过夜
3. 清毒剂杀菌/抑菌试验 (以小组为单位) 用圆纸片蘸2% 碘酒、75%酒精、1%新洁尔灭、2%汞溴红或甲紫贴于琼脂上,中央用生理盐水作对照 37℃培养过夜 棉签涂葡萄球菌 或大肠杆菌菌液 >
二、常见病原性球菌检查程序 葡萄球菌、链球菌、肠球菌、奈瑟球菌 葡萄球菌血浆凝固酶实验 胆汁溶菌实验 抗O实验
1. 观察病原性球菌培养物 b溶血(金葡菌) 金黄色菌落,完全透明溶血环 b溶血(A群链球菌) 灰白色菌落,表面光滑,边缘整齐,较宽的透明溶血环 a溶血(甲型溶血性链球菌)草绿色溶血环
血浆协同因子 纤维蛋白原 2.葡萄球菌血浆凝固酶实验 是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标 血浆协同因子 纤维蛋白原 游离凝固酶 凝血酶样物质 纤维蛋白 , 引起血浆凝固 结合凝固酶:为菌体纤维蛋白原受体,与血浆中血浆纤维蛋白原交联使 细菌凝聚
实验方法(每人都作) 生理盐水3环 以接种环取菌少许 制成均匀细菌悬液 金黄色葡萄球菌 白色葡萄球菌 于每滴细菌悬液内加入兔血浆各50mL,混匀 5min内观察结果,若出现大片凝集块为阳性,无凝集为阴性 金黄色葡萄球菌 白色葡萄球菌
3.抗链球菌溶血素O(streptolysin O, SLO)抗体(ASO)测定 SLO是A族链球菌的代谢产物,对多种细胞有毒性,可致心跳停止,动物死亡。SLO抗原性强,链球菌感染后2-3周体内产生大量ASO。测定此抗体效价可作为风湿热、急性肾小球肾炎等与链球菌感染有关的疾病的辅助诊断。
RBC 人血清 乳胶颗粒 SLO SLO乳胶试剂 感染患者血清 (ASO)
实验方法(每人都作) 将1-4孔各滴一滴第二次课分离的血清 每个圈上再滴加ASO1滴,用搅拌棒充分搅拌,3-5min观察结果。 2 3 4 阳性对照 阴性对照 有清晰凝集者为阳性,即ASO滴度>400U/ml; 不出现清晰凝集者为阴性。
4. 胆汁溶菌实验(以小组为单位) 胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌自溶酶,加速肺炎链球菌裂解自溶,而甲型溶血性链球菌无自溶酶产生。在血清肉汤培养基中培养2种链球菌18h,按下图加液后摇匀各管,置37℃15min后观察结果。 4 3 2 1 0.8mL甲型溶血性链球菌菌液 0.8mL肺炎链球菌菌液 0.2mL生理盐水 0.2mL10%去氧胆酸钠