实验2 相差显微镜和荧光显微 镜的使用及细胞器的观察 实验2 相差显微镜和荧光显微 镜的使用及细胞器的观察
一、实验目的 1.了解两种显微镜的用途。 2.掌握两种显微镜的原理、结构及使用方法。
二、实验原理 1.相差显微镜的工作原理 是通过环状光阑和相差板，利用光的衍射与干涉现象把肉眼难以分辨的相位差变为振幅差即明暗差。相差方法能对透明的活体进行直接观察，无需采用使细胞致死的固定和染色的方法。染色给活体以有害的影响，甚至失真。
二、实验原理 2.荧光显微镜的工作原理 就是利用一些特殊的装置，产生短波长的激发光，照射在样品上，从而激发细胞内的荧光物质或荧光染料发出长波长的可见光即荧光，结果在视野中形成荧光映像。
二、实验原理 ⑴自发荧光：细胞内天然物质经短波长的激发光照射后直接发出荧光的现象。 例如：叶绿体含有叶绿素发出红色荧光；细胞壁含有木质素发出黄色荧光。
二、实验原理 ⑵诱发荧光：有些生物材料或细胞组分自身不能发出荧光，但是与荧光物质结合后，激发后呈现一定颜色的荧光现象。 例如：经0.01%吖啶橙染色后，DNA发出绿色荧光，RNA发出淡红色荧光。
三、实验用品 1.器具：普通复式光学显微镜、相差显微镜附件、荧光装置附件、载玻片、盖玻片、滤纸、镜头纸、滤色镜片。
三、实验用品 2.药品：Ringer氏液或蒸馏水。 3.材料：洋葱、绿叶菠菜或绿色植物叶片。
四、实验方法 ㈠相差装置的安装 1.相差物镜的安装。 2.转盘聚光器的安装。 3.把绿色滤镜放入镜座的滤色镜支架上。
四、实验方法 1.把转盘聚光器的环状光阑调至“0”位，即将明视 场的普通可变光阑旋入光路。 2.将聚光器升至最高位置。 ㈡聚光器调中
四、实验方法 3.接通照明光源，使视场明亮。 4.将一有标本的载玻片置于载物台上，把4倍或低倍物镜旋入光路。 ㈡聚光器调中
四、实验方法 5.将视场光阑的开孔缩小一些，孔径光阑的开孔开大一些，寻找物象并聚焦。 ㈡聚光器调中 6.逐渐降低聚光器，直到视场光阑图像的边缘完全清晰为止。 ㈡聚光器调中
四、实验方法 ㈡聚光器调中 7.用两个调中螺杆推动调整聚光器位置，将缩小的视场光阑图像调至视场中心。 8.逐渐开放视场光阑，使得视场光阑像的边缘与视场边缘相接。
四、实验方法 ㈡聚光器调中 9.反复缩放视场光阑，确认光阑中心和边缘与视场完全重合。 10.将聚光器调回至顶点位置。
四、实验方法 ㈢相板圆环与环状光阑圆环的合轴调中 1.正确选用和匹配相差物镜与环状光阑。 2.把CT放入目镜筒。取下一个目镜，换入调中合轴望远镜（CT）,同时保证CT在使用前眼透镜处于最低位。
四、实验方法 ㈢相板圆环与环状光阑圆环的合轴调中 3.明环与暗环的调中重叠。在通过CT的观察下，手捏调中装置，移动明环，使之与暗环完全重叠合一。 4.回装观察目镜。
四、实验方法 ㈣制洋葱鳞茎表皮细胞装片并镜检观察
四、实验方法 （五）反射式荧光显微镜的使用 1.荧光显微镜装置的安装。 2.点亮高压汞灯。
四、实验方法 （五）反射式荧光显微镜的使用 3.高压汞灯的调中，汞灯电弧像聚焦调整。 4.将用荧光染料染色的标本，放在载物台上，用10倍物镜聚焦。
四、实验方法 （五）反射式荧光显微镜的使用 5.调整孔径光阑。在汞灯调中和聚焦时，光阑开到最大。观察时，孔径应适当缩小。 6.调整视场光阑。其开度一般应与孔径光阑的开孔相当。
四、实验方法 （五）反射式荧光显微镜的使用 7.选用适合的滤色镜系统。 8.制绿色植物叶片下表皮装片，镜检观察。
五、注意事项 1.使用相差显微镜时，载玻片和盖玻片应清洁无痕，载玻片的厚薄要均匀，厚度在1mm左右。
五、注意事项 3.每次更换物镜倍数时，要更换相匹配的环状光阑，并且都要重新进行相板圆环与环状光阑圆环的合轴调中。
五、注意事项 4.使用荧光显微镜时在未装滤光片的情况下，千万不要用肉眼直接观察，以免引起眼睛的损伤。 5.使用荧光显微镜时，用油镜观察荧光标本时，必须用本身不含荧光物质的镜油或甘油。
五、注意事项 6.使用荧光显微镜时，在制片过程中，不要用自身发荧光或抑制荧光发生的物质作固定剂、封埋剂，最好用冰冻切片，用蒸馏水贴片。
五、注意事项 7.使用荧光显微镜时，在比较暗的环境下观察。