TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice

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TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice 植物生理學實驗 6 TLC薄膜層析法分析果汁成分 thin-layer chromatography (TLC) juice 授課教授:傅士峯老師 助教:呂學宇、張凱雅 值日組:G6 2016.04.20

實驗目的 利用薄膜層析法 (TLC) 分離葡萄與葡萄汁,檢測葡萄汁是否有其他非天然添加物

實驗原理 - 色層分析法 色層分析法(chromatography) 微量、快速分離有機化合物 依操作不同分類: 1. 氣相層析法 (Gas chromatography) 2. 液相層析法 (Liquid chromatography) ① 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) ② 管柱層析法 CC (Column Chromatography) ③ 濾紙層析法 PC (Paper Chromatography) ④ 高效率液相層析法 HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

實驗原理 - 薄膜層析法 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) 屬於吸附層析  混合物中的各種成份對固定相的親合力 不同,當移動相 (展開液) 流經固定相時, 便會達到分離的目的  ① 固定相:是一片外層鍍上一層矽(Si)膠 的玻璃、塑膠片或鋁箔  極性  固定相親合力   滯留 ② 移動相:根據要分離的樣本選擇不同 極性的溶液  極性  固定相親合力   移動 https://www.youtube.com/watch?v=rbp_Qc4jMAc https://www.youtube.com/watch?v=rgkRf3LD5OU

實驗原理 - 薄膜層析法 薄膜層析法 TLC (Thin -layer Chromatography) 顯色 ① 分離的物質是有顏色的,則可以肉眼在 薄片上看出顏色 ② 利用紫外光(UV light)照射  吸收紫外光而呈現黑點 ③ 合適的染色方法(呈色劑) 分析: 計算出Rf值 https://www.youtube.com/watch?v=rbp_Qc4jMAc https://www.youtube.com/watch?v=rgkRf3LD5OU

實驗原理 - Rf值 Rf值 (retention factor value) 一個化合物在薄層板上升的高度與展開劑上昇高度的比值 得到不同物質對固定相親合力數值相對比 該物質移動距離 公式: 展開液移動距離

實驗步驟

實驗器材 器材 數量 TLC 3 條 玻璃管 + 蓋子 3 組 研缽組 1(2)組 甲醇 3 ml 90%丙酮 1 ml 10 ml tip 鉛筆 1 尺 鑷子 實驗材料 3 種 注:TLC物直接用手拿取, 請用鑷子

實驗器材 控制組 實驗組 ① ② 實驗材料 葡萄 ( 含皮 ) 葡萄汁 紫蘇 綠色葉片 紫色食用色素

實驗器材 紫色食用色素 實驗組 紫蘇 綠色葉片 G1 G5 G9 G2 G6 G10 G3 G7 G11 G4 G8 G12 G13 ② 1

實驗步驟 用鉛筆輕輕的在TLC上畫記號 ① 從底部量 1.5 cm,在中央化垂直線 ② 從上方量 1 cm 配置萃取液: 依據下方表格,秤量指定物品後,放入研缽研磨 1 cm 10 cm 葡萄 ( 含皮 ) 葡萄汁 紫蘇 0.5g 紫蘇 + 1000ml 90%丙酮 綠色葉片 0.1g 葡萄 + 400ml 水 - 紫色食用色素 1.5 cm

實驗步驟 在十字交會點,用tip快速沾取並點上溶液,利用吹風機等待乾掉後,重複此步驟數次,當點的顏色深度可以覆蓋鉛筆筆跡即可 配置展開液: 依據表格,將不同展開液溶液加入玻璃管中,並輕輕蓋上蓋子 1 cm 注:① 點越小越好 ② 前一個點乾了才點下一個點 10 cm 葡萄 葡萄汁 紫色食用色素 1600 ml 甲醇 + 400 ml 90%丙酮 紫蘇 綠色葉片 1 c.c. 90%丙酮 + 1 c.c. 石油醚 1.5 cm

實驗步驟 用鑷子夾起TLC,打開蓋子,快速將TLC放置瓶子中央,並馬上蓋上蓋子 等待展開液到達第二條鉛筆線即馬上將TLC夾出

預期結果

預期結果 胡蘿蔔素  葉綠素a 葉綠素b 葉黃素 葡萄 X牌葡萄汁 Y牌葡萄汁 色素 日日春 紫蘇

實驗結果 放上「TLC結果圖」, 說明葡萄汁與葡萄在TLC結果上是否有差異?

問題與討論 與其他組比較 哪一牌的葡萄汁較接近原汁?哪一牌有加入食用色素? 寫出紫蘇與綠色葉片TLC上有看到哪些光合色素? 1 2 3 4 實驗組② 紫蘇 綠色葉片 紫色 食用色素 1 2 3 4 5 6 7 8 13 9 10 11 12

報告繳交 報告格式: 實驗目的、原理、結果、問題討論、 補充資料(自行整理)、心得 繳交期限:下週 (4/27) 課程結束前