The construction of cells 06.1 The construction of cells DNA or RNA Protein Carbohydrates Lipid etc.
Isoelectric point of protein pH < pI Protein is positive charge. pH > pI Protein is negative charge.
Amino Acid Sequences of Cytochromes c from 38 species
A phylogenetic tree of cytochrome c
Bioprocess Engineering 04.1 養菌&bioreactor Bioprocess Engineering 基因重組﹝PCR, host selection﹞ 或微生物篩選﹝plasmid selection﹞ Lab. 生產 工廠生產 前處理﹝殺菌等﹞ 生化反應器 破碎細胞 分離及純化 Recombinant protein metabolites 細胞固定化﹝酵素固定化﹞
蛋白質的沈澱作用 能使蛋白質發生沈澱作用的因素有: 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子(汞離子、鉛離子等) 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱 06.2 蛋白質的沈澱作用 能使蛋白質發生沈澱作用的因素有: 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子(汞離子、鉛離子等) 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱
﹝五﹞蛋白質純化 Salting out﹝鹽析﹞ Ammonium sulfate
﹝五﹞蛋白質純化 等電點沉澱
蛋白質的溶解度 pH值:當pH值在其等電點(pI)時,溶解度最小。 鹽濃度:當在低濃度時,蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的增加而增加,稱為Salting-in。當鹽濃度高至某一濃度時,蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的增加而減少,稱為Salting-out。 溶媒的介電常數(Dielectric contant):酒精、丙酮的常數較水小,使蛋白質分子在此溶媒中的斥力較小,溶解度較低。 4. 溫度:在一限定的溫度(約0~40℃)下,大部份的蛋白質溶解度隨溫度的上升而增加。
Ion exchange chromatography R+A- + B- R+B- + A-
Gel filtration chromatography
Gel filtration chromatography V0:void volume Ve:elution volume
Affinity chromatography
fusion protein: 6-histidine tag 27
Dialysis Cellophane nitrocellulose collodion