植物組織自由基之偵測 植物生理學實驗 10 ROS detection in plants 授課教授:傅士峯老師 助教:呂學宇、張凱雅 值日組:G9 104/11/25
實驗目的 自由基與植物之抗逆性和衰老有密切關係,藉由觀察偵測植物病死斑中的自由基,了解植物防禦病害的現象與機制 了解植物組織中自由基測定的原理與方法
實驗原理
檢測過氧化氫-DAB 染色法 過氧化氫藉由過氧化氫酶 (Catalase, CAT) 的催化產生氧氣與水,同時過氧化物酶 (Peroxidase, POD) 藉氧氣使無色的 DAB 氧化形成棕色沉澱,並定位於過氧化氫累積位置 (無色) (棕色)
In situ detection of H2O2 by DAB
In situ detection of H2O2 by DAB
In situ detection of H2O2 by DAB
In situ detection of H2O2 by DAB
In situ detection of H2O2 by DAB
預期結果 tobacco
實驗步驟 製備 H2O2 檢測液 注射 DAB 與反應 退染與實驗結果 配置 10mM MES buffer pH6.5 (現配) 配置 0.2% DAB 溶液 (溶解於 MES buffer) 注射 DAB 與反應 葉片受傷部位用針筒注射 DAB 溶液 將注射過的葉片剪下,放入培養皿(裝水少許) 鋁箔紙包覆避光,室溫反應8小時 退染與實驗結果 葉綠素退染:浸泡 95% 酒精/室溫/搖晃一天 (值日組,G9) 結果觀察:W5 各組至植物基因工程實驗室觀察染色結果
問題討論 請說明為何受傷的組織中,自由基的含量明顯較其他組織中的含量高?(可不抄題)
報告繳交 報告格式:實驗目的、原理、結果、問題討論、補充資料、心得 繳交期限:下週 (12/02) 課程結束前
The End