Molecular Biology Presentation 生醫三 Group 13 992334 林思慧 992339 黃珮瑄
LB plate Negative control Positive control Ligation 13-1 Ligation 13-2
Plasmid DNA M:marker Black:person 1 (思慧) L:ligation Blue:person 2 (珮瑄) 13 M P L1 L2 13* P* L1* L2* 8.0 kb 3.0 kb 1.0 kb 0.5 kb M:marker L:ligation P:positive Black:person 1 (思慧) Blue:person 2 (珮瑄) * : treated with restriction enzyme
Discussion 塗菌的時候沒有塗均勻，colonies沒有分散，挑菌的時候不易找到單一的菌落。 跑DNA電泳時，因為在load DNA不小心太快，部分DNA會被沖到well外，使得跑出來的兩組band亮度稍微不同。
Summary 塗盤 DNA電泳 Negative control知道Ampicillin有效抑制雜菌生長 Positive control中攜帶抗Amp gene的細菌能夠生長 Ligation的LB plate上都是攜帶抗Amp gene的DH5α菌株 DNA電泳 經酵素切過後，ligation1&2在1kb的位置都有跑出band，即transformation有成功將帶有DNA片段的vector轉入DH5α菌株中。
SDS-PAGE (CBR) - + - + - + - + - + - + Purification No Purification GST GST-D IPTG GST GST GST-D GST-D GST GST GST-D GST-D M - + - + 75kDa - + - + - + - + 28kDa - : No Purification + : Purification
PVDF membrane (Antibodies) Purification No Purification GST GST GST-D GST-D M GST GST GST-D GST-D 75kDa 28kDa
PVDF membrane (CBR) Purification No Purification M GST GST GST-D GST-D 75kDa 28kDa
Discussion 在封膠的時候有小泡泡，所以膠有龜裂的現象 可能配膠時沒有做好，所以不管是maRker還是蛋白跑的結果中會看到糊掉的maRker或染出直線狀痕跡 Transfer過程沒有完全趕掉泡泡，阻擋protein與PVDF結合，但是在這裡不影響實驗結果的觀察 可能Transfer到PVDF membrane上的蛋白量很少，或者抗體作用不完全，導致免疫染色的結果不佳
Summary 經過IPTG誘導基因表達並加以純化，western blot結果在~28kDa有大量蛋白的表現。 由PVDF membrane上的CBR檢測結果可知PVDF membrane上是有蛋白成功transferred。利用免疫染色更容易探討單一個蛋白的表現。這個部分實驗可以再次做確認。
References 慧眾生物科技有限公司-1kb DNA Ladder DL1000 http://www.bioman.com.tw/pr_cont.asp?id=3&myarea=1
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